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        磁微粒子化学发光法测定AFP、CEA的应用

        互联网

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        作者:施立新 刘云庆

        【摘要】 目的 研究磁微粒子化学发光酶免疫法检测的可靠性及方法学评价。 方法  利用磁微粒子化学发光法检测血清AFP、CEA,并进行精密度、灵敏度、特异性、回收率方面的探讨。 结果  化学发光法测定AFP的线性范围0.30~1380μg/L,CEA的线性范围0.51~1067μg/L。测定AFP的批内精密度CV值为1.16%~3.53%,批间为1.49%~4.67%;CEA的批内精密度CV值为0.87%~4.47%,批间为1.92%~4.71%。AFP的最低检测限度0.30μg/L;CEA的最低检测限度0.51μg/L。AFP的回收率97.7%~99.0%;CEA的回收率98.4%~101.65%。黄疸、脂血、溶血对AFP、CEA的测定无明显影响。 结论  磁微粒子化学发光酶免疫法在病人结果可报告范围宽、精密度好、灵敏度高、特异性高、抗干扰能力强。

                 近十年来通过不断改进和发展,使化学发光免疫分析成为非放射性标记免疫分析中最有前途的方法之一。测定时间短,无放射污染等特点,广泛应用在临床和科研 [1] 。甲胎蛋白(AFP)和癌胚抗原(CEA)是最常用的肿瘤标志物之一。它们的测定有助于肿瘤病人的诊断、治疗及术后疗效观察。BECKMAN COULTER公司生产的ACCESS型免疫分析仪,即全自动微粒子化学发光免疫分析系统。我们用此法对血清中的AFP和CEA的测定,作了精密度、分析灵敏度、回收试验及干扰试验等实验,现报告如下。

          1 材料与方法
            
          1.1 仪器 美国BECKMAN COULTER公司生产的ACCESS型全自动化学发光免疫分析仪。
           
          1.2 试剂 AFP和CEA试剂盒由BECKMAN COULTER公司提供配套试剂。
           
          1.3 方法 按仪器操作手册,用配套试剂盒测定定值、样品。数值在标定值允许的范围内,继续做精密度、灵敏度、回收试验和干扰试验等相关实验。

          2 结果
            
          2.1 精密度 采取批内和批间差异来确定。分别取AFP和CEA高、中、低浓度各三份混合血清标本,其中一半重复测定20次,计算均值、方差,及批内CV值。另外一半分成20份,装入塑料离心管置于-20℃冰箱,每天1次连续测定20天,计算均值、方差及批间CV值。结果见表1。
            
          表1 AFP和CEA批内、批间变异值(略)
           
          2.2 分析灵敏度 分别对AFP和CEA空白零标准作批内20次检测,分别记录发光强度并作统计,再计算检测低限(LLD) [2] 。公式:LLD=均值BLK+2SBLK。结果AFP低限为0.30μg/L,CEA为0.51μg/L。
           
          2.3 回收试验 取不同浓度的混合血清(AFP为4.34、23.85、138.21;CEA为1.89、15.23、58.65)分别加入不同浓度定值血清的AFP和CEA。分别测定AFP和CEA的含量,用公式:(测定值-混合血清值)/定值血清值×100%计算回收率,结果AFP的低、中、高标本平均回收率分别为97.7%、98.5%、99.0%。CEA的低、中、高平均回收率分别为101.6%、98.4%、99.5%。
            

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