中性粒细胞碱性磷酸酶染色标准操作规程

<center>  </center>

1. 实验原理

在PH9.2-9.8的缓冲溶液中，细胞中的碱性磷酸酶能将底物磷酸苯酚钠水解，生成 α-苯酚和磷酸钠，再以稳定的重氮盐与酚偶联成不溶性有色偶氮染料沉淀于胞浆中。

2. 标本采集

 

 

2.1 病人准备：了解病人是否对局麻药有过敏史，凝血因子严重缺陷引起的出血

 

 

性疾病，穿刺部位有炎症或有畸形，晚期妊娠的妇女作骨穿时要慎重。

 

 

2.2 标本种类： 新鲜抽取的骨髓穿刺液。

2.3 标本采集要求：

2.3.1 高压消毒的穿刺针，一次性无菌手套和抽取骨髓液的无菌注射器。

 

 

2.3.2 临床上首选穿刺部位为髂后上棘，翻身困难，需多部位穿刺患者可选择髂前上棘为穿刺部位。小于3岁的小儿还可选择胫骨头内侧为穿刺部位。

 

3. 标本储存：滴加95％ 乙醇盖满血膜10分钟，水洗待干，室温避光保存。

 

 

4. 标本运输：室温运输。

5. 标本拒收的标准：溶血，稀释标本不能作测定。

6. 试剂：

6.1 试剂名称：中性粒细胞碱性磷酸酶染色试剂。

 

6.2 试剂生产厂家：上海太阳生物技术公司

 

6.3 试剂组成：

 

试剂1. 固定剂：甲醛10ml加甲醇90ml混合，2℃~8℃避光保存，有效期6个月。

试剂2. 贮存液：200mgα-磷酸苯酚钠(AS-BI)溶于1mlN-N二甲基甲酰胺+200ml Tris-Hcl缓冲液，2℃~8℃避光保存。

试剂3. Tris-Hcl缓冲液，Tris 4.85g溶于200ml蒸馏水，加浓Hcl1滴~2滴，PH固定为9.1。

试剂4. 作用液：取贮存液2ml于温水中30℃预热5分钟加坚固蓝BB盐2mg，混合。

 

试剂5. 中性红溶液：2℃~8℃避光保存。