【专题讨论】关于蒽酮硫酸法多糖检测葡萄糖和多糖里的转换因子问题
丁香园论坛
6043
新手向各位大虾请教
我采用蒽酮硫酸法检测多糖，看文献上是直接采用葡萄糖的结果当成多糖含量。但后来又采用不同的方法将多糖水解后测单糖，所测的单糖含量远远高于用葡萄糖所测的多糖含量。后来又看了一下苯酚硫酸法测多糖，有个葡萄糖和多糖的转换因子，所以请教各位蒽酮硫酸法的转换因子怎么计算。
这是苯酚硫酸法中的葡萄糖标准曲线
精确量取葡萄糖标准溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7ml置干燥试管中，分别加水使成1.0ml，再分别加入5%苯酚溶液1.6ml，摇匀，然后加H2SO4 7.0ml，充分摇匀，室温放置25min，在400～600nm处测定其最大吸光度，同时做一空白。
这是苯酚硫酸法中的多糖
精确称取60°C干燥恒重的多糖20mg，水溶解后定容到100ml量瓶中，摇均，作为多糖储备液。
精确量取多糖储备液0.2ml，加水至1ml，按测定标准曲线同样的方法测其吸光度值。按下式计算换算因素。
这是苯酚硫酸法中的转换因子公式
f=W/CD
式中：W为多糖重量(ug)，C为多糖液中葡萄糖的重量(ug)，D为多糖的稀释倍数
对于苯酚硫酸法中D有个疑问就是（ 多糖1ml+硫酸7ml+苯酚1.6ml反应） 算不算多糖稀释了9.6x？
如果算得话多糖的稀释倍数应该是不是在X9.6
蒽酮硫酸法中的葡萄糖标准曲线
标准曲线精确吸取标准葡萄糖溶液0.1ml、0.2ml、0.3ml、0.4ml、0.5ml、0.6ml、0.7ml于10ml的容量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀。分别取1.0ml于10ml具塞试管中，以1.0ml蒸馏水作空白对照，各加蒽酮-硫酸试液4.0ml，摇匀，置沸水中加热10min，迅速冷却至室温，于620nm测定吸光度A
多糖检测同上
疑问1：硫酸蒽酮法中的（多糖1ml+硫酸4ml反应）算不算多糖稀释了5X？
疑问2：转换因子公式还是f=W/CD？还同苯酚硫酸法的公式一样吗？
疑问3：还有就是在论坛上看到一个大虾的换算因子公式，看不太懂，有谁能帮解决指点一下吗？
换算因子f=w/[c杯（9.6/0.2）杯 移取的多糖重量（ug）
c杯------来自回归方程（ug/ml）
100------多糖定容后的总体积（ml）
0.2-------吸取的多糖溶液的体积（ml）
9.6--------测定时稀释后的总体积（ml）
2.多糖%=CDf/undefined100=[ c杯样
c杯--------来自回归方程（ug/ml）
250--------样品定容的总体积（ml）
9.6-----测定时稀释后的总体积（ml）
v---------测定时吸取的样品溶液的体积（ml）
w--------样品重（ug）
f-----换算因子
我采用蒽酮硫酸法检测多糖，看文献上是直接采用葡萄糖的结果当成多糖含量。但后来又采用不同的方法将多糖水解后测单糖，所测的单糖含量远远高于用葡萄糖所测的多糖含量。后来又看了一下苯酚硫酸法测多糖，有个葡萄糖和多糖的转换因子，所以请教各位蒽酮硫酸法的转换因子怎么计算。
这是苯酚硫酸法中的葡萄糖标准曲线
精确量取葡萄糖标准溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7ml置干燥试管中，分别加水使成1.0ml，再分别加入5%苯酚溶液1.6ml，摇匀，然后加H2SO4 7.0ml，充分摇匀，室温放置25min，在400～600nm处测定其最大吸光度，同时做一空白。
这是苯酚硫酸法中的多糖
精确称取60°C干燥恒重的多糖20mg，水溶解后定容到100ml量瓶中，摇均，作为多糖储备液。
精确量取多糖储备液0.2ml，加水至1ml，按测定标准曲线同样的方法测其吸光度值。按下式计算换算因素。
这是苯酚硫酸法中的转换因子公式
f=W/CD
式中：W为多糖重量(ug)，C为多糖液中葡萄糖的重量(ug)，D为多糖的稀释倍数
对于苯酚硫酸法中D有个疑问就是（ 多糖1ml+硫酸7ml+苯酚1.6ml反应） 算不算多糖稀释了9.6x？
如果算得话多糖的稀释倍数应该是不是在X9.6
蒽酮硫酸法中的葡萄糖标准曲线
标准曲线精确吸取标准葡萄糖溶液0.1ml、0.2ml、0.3ml、0.4ml、0.5ml、0.6ml、0.7ml于10ml的容量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀。分别取1.0ml于10ml具塞试管中，以1.0ml蒸馏水作空白对照，各加蒽酮-硫酸试液4.0ml，摇匀，置沸水中加热10min，迅速冷却至室温，于620nm测定吸光度A
多糖检测同上
疑问1：硫酸蒽酮法中的（多糖1ml+硫酸4ml反应）算不算多糖稀释了5X？
疑问2：转换因子公式还是f=W/CD？还同苯酚硫酸法的公式一样吗？
疑问3：还有就是在论坛上看到一个大虾的换算因子公式，看不太懂，有谁能帮解决指点一下吗？
换算因子f=w/[c杯
c杯------来自回归方程（ug/ml）
100------多糖定容后的总体积（ml）
0.2-------吸取的多糖溶液的体积（ml）
9.6--------测定时稀释后的总体积（ml）
2.多糖%=CDf/undefined100=[ c杯
c杯--------来自回归方程（ug/ml）
250--------样品定容的总体积（ml）
9.6-----测定时稀释后的总体积（ml）
v---------测定时吸取的样品溶液的体积（ml）
w--------样品重（ug）
f-----换算因子
