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        【专题讨论】关于蒽酮硫酸法多糖检测葡萄糖和多糖里的转换因子问题

        丁香园论坛

        5990
        新手向各位大虾请教

        我采用蒽酮硫酸法检测多糖,看文献上是直接采用葡萄糖的结果当成多糖含量。但后来又采用不同的方法将多糖水解后测单糖,所测的单糖含量远远高于用葡萄糖所测的多糖含量。后来又看了一下苯酚硫酸法测多糖,有个葡萄糖和多糖的转换因子,所以请教各位蒽酮硫酸法的转换因子怎么计算。

        这是苯酚硫酸法中的葡萄糖标准曲线
        精确量取葡萄糖标准溶液0.10.20.30.40.50.60.7ml置干燥试管中,分别加水使成1.0ml,再分别加入5%苯酚溶液1.6ml,摇匀,然后加H2SO4 7.0ml,充分摇匀,室温放置25min,在400600nm处测定其最大吸光度,同时做一空白。

        这是苯酚硫酸法中的多糖

        精确称取60°C干燥恒重的多糖20mg,水溶解后定容到100ml量瓶中,摇均,作为多糖储备液。
        精确量取多糖储备液0.2ml,加水至1ml,按测定标准曲线同样的方法测其吸光度值。按下式计算换算因素。

        这是苯酚硫酸法中的转换因子公式
        f=W/CD
        式中:W为多糖重量(ug)C为多糖液中葡萄糖的重量(ug)D为多糖的稀释倍数

        对于苯酚硫酸法中D有个疑问就是( 多糖1ml+硫酸7ml+苯酚1.6ml反应) 算不算多糖稀释了9.6x?
        如果算得话多糖的稀释倍数应该是不是在X9.6

        蒽酮硫酸法中的葡萄糖标准曲线
        标准曲线精确吸取标准葡萄糖溶液0.1ml0.2ml0.3ml0.4ml0.5ml0.6ml0.7ml10ml的容量瓶中,加蒸馏水至刻度,摇匀。分别取1.0ml10ml具塞试管中,以1.0ml蒸馏水作空白对照,各加蒽酮-硫酸试液4.0ml,摇匀,置沸水中加热10min,迅速冷却至室温,于620nm测定吸光度A

        多糖检测同上
        疑问1:硫酸蒽酮法中的(多糖1ml+硫酸4ml反应)算不算多糖稀释了5X?
        疑问2:转换因子公式还是f=W/CD?还同苯酚硫酸法的公式一样吗?
        疑问3:还有就是在论坛上看到一个大虾的换算因子公式,看不太懂,有谁能帮解决指点一下吗?
        换算因子f=w/[c9.6/0.2 w------
        移取的多糖重量(ug
        c------来自回归方程(ug/ml
        100------多糖定容后的总体积(ml
        0.2-------吸取的多糖溶液的体积(ml
        9.6--------测定时稀释后的总体积(ml
        2.多糖%=CDf/undefined100=[ c
        c--------来自回归方程(ug/ml
        250--------样品定容的总体积(ml
        9.6-----测定时稀释后的总体积(ml
        v---------测定时吸取的样品溶液的体积(ml
        w--------样品重(ug
        f-----换算因子
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