【求助】急：外源蛋白与宿主细胞膜发生黏附，求检测方法

课题研究外源分泌蛋白与宿主细胞的相互作用，现有一分泌蛋白能粘附于Hela细胞膜，引起后续一系列反应，但作用位点未知，且该蛋白作用于细胞膜，但未被吞噬进胞内，求怎样检测该蛋白粘附于膜的量

定性可以用免疫荧光，定量也可以大概的用免疫荧光看看。

定性用免疫荧光做，具体方法：
1、做Hela细胞的细胞爬片
2、用5%BSA的PBS溶液去封闭，
3、用你的外源分泌蛋白与之结合（外源分泌蛋白溶于PBS中，具体浓度待摸索）
4、然后PBS漂洗3次，再用你的外源分泌蛋白的荧光抗体去结合（溶于5%BSA的PBS溶液中）
5、PBS漂洗3次，荧光显微镜观察结果，看荧光是否在膜上。
本人做的是用自己表达的蛋白，所以上面有undefinedhis标记，所以用的是抗-HIS的一抗，然后用的荧光二抗。

本实验中的细胞是否用多聚甲醛固定要自己做实验试试，我那时两种方法都做了，没有区别。

定量检测的话可以使用流式检测，具体可见我的附件给出的例子（横轴当时标记的是绿色荧光，故偷懒使用了Annexin V的原来标记而未改成FITC），若你要得到每个细胞上结合了多少ug的你的目标蛋白的话，可能比较难。

多谢两位回复 参考做做试试