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        细胞膜通透性测定实验

        相关实验:细胞膜通透性测定实验

        最新修订时间:

        简介

        细胞膜是细胞与外环境进行物质交换的屏障,是一种半透膜,即可选择性地控制物质进出细胞。

        原理

        细胞膜通透性测定实验的基本原理是若将红细胞置于低渗溶液中,由于细胞内的溶质浓度高于细胞外,所以液体很快进入细胞内,使胞膜胀破,血红蛋白逸出,即发生溶血。若将红细胞置于各种等渗溶液中,红细胞膜对各种溶质分子的通透性不同,有的溶质分子可透入,有的则不能透入;即使能透入,速度也各有差异。因此,当易透入的溶质分子进入红细胞,随胞内溶质分子浓度增加,导致水分摄入,红细胞膨胀,细胞膜最终破裂出现溶血。此时,光线较容易通过溶液,原为不透明的红细胞悬液突然变成红色透明的血红蛋白溶液。根据溶质透入的速度不同,溶血时间也不同。因此,可通过测量溶血时间来估计细胞膜对各种物质通透性的大小。

        材料与仪器

        器材:

        试管、试管架、记号笔、滴管、载片、盖片、镊子、滤纸、显微镜。

        试剂:


        ① 10% 羊红细胞悬液(取 10 ml 小鼠血加入到 90 ml 生理盐水中混匀)


        ② 兔红细胞悬液或小鼠红细胞悬液
        ③ 蒸馏水
        ④ 0.17 mol/L NaCl 溶液
        ⑤ 0.17 mol/L NH4Cl 溶液
        ⑥ 0.32 mol/L 葡萄糖溶液
        ⑦ 0.32 mol/L 甘油
        ⑧ 0.8 mol/L 甲醇溶液
        ⑨ 0.8mol/L 丙三醇溶液
        ⑩ 氯仿


        ⑪ M-缓冲液(咪唑(Imidazole),3.404 g;KCl,3.7 g;MgCl2▪6 H2O,101.65 mg;ECTA,380.35 mg;EDTA,29.224 mg;巯基乙醇,0.07 ml;甘油,297 ml;蒸馏水,加至 1000 ml。用 1mol/L HC1 调 pH 至 7.2,室温保存)


        ⑫2 %Triton X - 100 溶液(量取 2 ml Triton X-100(聚乙二醇辛基苯基醚)液,加 M-缓冲液 98 ml 即可。)

        步骤

        细胞膜通透性测定实验的基本过程可分为如下几步:

        A 轻轻振摇一下盛有制备好的羊血红细胞悬液的试管,观察悬液的特点,为一种不透明的红色液体。

        B 观察红细胞在低渗溶液中发生的溶血现象 在 1 只试管中加入 0.3 ml 红细胞悬液,再加入 3 ml 蒸馏水,轻轻摇匀,注意观察溶液颜色的变化。可见溶液由不透明的红色(隔着它不能看到试管后面纸上的字)变成红色澄清液(此时可清楚看到纸上的字),即已发生溶血。记录好时间。

        C 测定红细胞对各种物质的选择通透性 取 8 只试管,分别加入 0.17 mol/L 氯化钠溶液、0.17 mol/L 氯化铵溶液、0.32 mol/L 葡萄糖溶液、0.32 mol/L 甘油、0.8 mol/L 甲醇溶液、0.8 mol/L 丙三醇溶液、氯仿、2% Triton X-100 溶液各 3 ml,作出标记后,各管均加人红细胞悬液 2 滴,混匀后静置于室温中。

        注意事项

        试管要根据实验所要装的溶液种类来编号,吸管也要对应编号,切勿混淆,以保证实验结果的准确性。

        来源:丁香实验

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