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        【求助】如何让一个胞浆蛋白上膜

        丁香园论坛

        1341
        我手头有一个胞浆蛋白,是一个离子通道的辅助亚基,我的实验设计希望它表达后上膜,现在我的初步设想是在这个蛋白的N端挂一个CD4,但是我担心CD4太大会影响我这个蛋白的本身功能(也许通过改变linker的长度可以减小影响),请问是否有人知道,有没有什么比较经典的改造方式,比如连一个其他什么蛋白甚至某段domain,而对蛋白本身的表达和功能没有影响,不胜感激!
        我记得以前看到一篇文章,好像是PLOS PATHOGEN上的,实在找不到了。也是要将胞浆蛋白移到胞膜上,他是采用水泡性口炎病毒胞膜蛋白(VSV-G)偶联目的蛋白,效果很好。因为VSV-G是一种可以和广泛存在于哺乳动物细胞膜上的脂类结合的包膜糖蛋白,一般的表达量很高,而且是一种病毒蛋白避免了一些内源性分子的影响。LZ可以尝试一下。
        版主freecell留言:
        感谢您的精彩答复。欢迎有空过来坐坐。本版欢迎您!
        感谢楼上的,但是VSV-G大小估计比我提到的CD4还要大吧,虽然说对表达没影响,但可能会影响我的蛋白的功能,我自己查了一些文献,目前有两个思路,一是在N-terminus连一个信号肽,这样翻译完进入ER后还会被切掉,应该不会影响功能;二是在我的目的蛋白C-terminus连上一个CAAX box,这个CAAX box是ras蛋白的membrane localization signal,20个氨基酸大小,对蛋白本身的功能影响应该也不大。感觉这个问题没什么人答复,可能这方面的研究比较少,将这两个思路同大家分享一下,也许以后会有用
        连一个HSP怎样?
        热休克蛋白不是主要胞浆分布吗?我还真不清楚。。。

        本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你,都可以成为师兄的好伙伴

        师兄微信号:shixiongcoming

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