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        【求助】请教各位老师,如何检测一个细菌中的已知序列后的一个功能基因

        丁香园论坛

        907
        请教各位老师,如果检测一个细菌中的已知序列后的一个功能基因

        说具体点,我用PCR扩得了一个IS的启动子,但想知道这个启动子的下游接的什么基因,请问如何实现?谢谢了!
        菌落杂交
        1 作 DNA cosmid 文库。
        2 PCR 扩增 IS 启动子,放射性同位素或者非放射性(地高新)标记做探针。
        3 plate hybridization. 找出阳性克隆,然后粘粒测序。

        或者
        1 PCR 扩增 IS 启动子,放射性同位素或者非放射性(地高新)标记做探针用。
        2 酶切细菌基因组DNA,电泳,杂交,找出该酶切后,含 IS 序列的核酸所在的位置。假如 5 kb左右。
        3 重新酶切细菌基因组DNA,电泳,胶回收 5kb 左右的所有 DNA 。
        4 所有的回收片断进行自连。
        5 Reverse PCR
        6 克隆进载体,扩增,测序。

        至于后面接续的基因的功能,那应该有更多的方法了。
        谢谢LS的老师,我对杂交这系列的实验不怎么了解,请问有类似的PPT或文章推荐给我学习下吗?

        再问,有类似你说的从步骤1到步骤6的文章吗?谢谢了!
        杂交的具体操作步骤可以参考产品说明书。

        具体的文章,还是你自己查吧,NCBI 上应该可以查到很多。

        本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你,都可以成为师兄的好伙伴

        师兄微信号:shixiongcoming

        【求助】请教各位老师,如何检测一个细菌中的已知序列后的一个功能基因

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