【求助】GFP做报告基因的相关问题
丁香园论坛
6344
请教高人：
我现在想用GFP做报告基因，在大肠杆菌中表达蛋白，想请教一下大家用GFP做报告基因是就是在含有GFP的质粒中扩GFP的全长吗？有没有人对GFP基因进行过改造？让报告基因的序列最短还能使表达的蛋白发荧光？
我现在想用GFP做报告基因，在大肠杆菌中表达蛋白，想请教一下大家用GFP做报告基因是就是在含有GFP的质粒中扩GFP的全长吗？有没有人对GFP基因进行过改造？让报告基因的序列最短还能使表达的蛋白发荧光？
1、如果你单纯想表达GFP蛋白，那么转化含GFP基因的表达载体即行。
2、如果你想表达GFP融合蛋白，那么在GFP上游或下游插入目的基因即可。只是有些细节要注意的。
3、有人改造GFP基因让其荧光更强，只是改变某些氨基酸，至于GFP长度缩短的改造，我没发现，可能是因为GFP得以激发荧光需要GFP蛋白形成一个桶形结构才行，而不是单纯的具有“生色基团”就行了。
2、如果你想表达GFP融合蛋白，那么在GFP上游或下游插入目的基因即可。只是有些细节要注意的。
3、有人改造GFP基因让其荧光更强，只是改变某些氨基酸，至于GFP长度缩短的改造，我没发现，可能是因为GFP得以激发荧光需要GFP蛋白形成一个桶形结构才行，而不是单纯的具有“生色基团”就行了。
3、有人改造GFP基因让其荧光更强，只是改变某些氨基酸，至于GFP长度缩短的改造，我没发现，可能是因为GFP得以激发荧光需要GFP蛋白形成一个桶形结构才行，而不是单纯的具有“生色基团”就行了。
改造这玩意可不是随便弄得吧。谁都能搞，还怎么得Nobel Price呢。
fishbody wrote:
改造这玩意可不是随便弄得吧。谁都能搞，还怎么得Nobel Price呢。
当然改造不是随随便便能改造的啊，正是因为“有人”发明并改造了才得Nobel price的。:)
如是没有人改造又何来增强型的GFP呢？
Fasta921 wrote:
当然改造不是随随便便能改造的啊，正是因为“有人”发明并改造了才得Nobel price的。:)
如是没有人改造又何来增强型的GFP呢？
都获得诺贝尔奖的成果了，多查查，拿来直接就可以了吧。
fishbody wrote:
都获得诺贝尔奖的成果了，多查查，拿来直接就可以了吧。
我的意思不是叫楼主去改造啊，能随便改的么？现在带有GFP报告基因的载体很成熟的了。
谢谢各位大侠，我在查文献考虑考虑！
Fasta921 wrote:
我的意思不是叫楼主去改造啊，能随便改的么？现在带有GFP报告基因的载体很成熟的了。
俺也是这意思。
本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴
师兄微信号：shixiongcoming
