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        【求助】小鼠体内外源性骨形态发生蛋白的测定

        丁香园论坛

        1780
        请教各位实验高手,我在做重组人骨形态发生蛋白2(rhBMP-2)的体内缓释实验,实验过程是将复合有rhBMP-2的载体材料植入小鼠四肢肌肉内,定期测定体内rhBMP-2的缓释和表达水平,请问采用什么方法更准确、简便,当初想采用ELISA定期测定小鼠外周血清,但有人说小鼠该蛋白与人有较强的同源性,测定值包含有自身BMP,那么如何将内源性和外源性区别开呢。另外,复合rhBMP-2载体材料植入区软组织的该蛋白的表达和定量用组织匀浆ELISA法还是免疫组化或者RT-PCR法,哪种方法更能说明问题,谢谢!
        那么如何将内源性和外源性区别开呢?

        找一种单抗,只针对人的表位,与鼠的BMP-2没有交叉。

        哪种方法更能说明问题?

        前两个是蛋白水平,RT-PCR是基因水平。三个试验研究角度不同,说明的问题也不同,如果有条件都做一做。
        这个试验是用质粒表达蛋白吗?如果是这样的话,基因水平是必须的,所以RT-PCR必须做。
        如果你的目的是研究rhBMP-2的缓释,只有做血清的ELISA定期测定才能说明问题。
        谢谢,我的目的就是观察缓释,不是质粒表达蛋白,只是单纯的高分子材料载体复合蛋白,看来只有用ELISA法了,不过我想测定一下植入材料局部组织的蛋白表达的话,是否应该再做一下免疫组化。问的问题比较菜,见笑啊。
        baifeng1979 wrote:
        谢谢,我的目的就是观察缓释,不是质粒表达蛋白,只是单纯的高分子材料载体复合蛋白,看来只有用ELISA法了,不过我想测定一下植入材料局部组织的蛋白表达的话,是否应该再做一下免疫组化。问的问题比较菜,见笑啊。


        你这个试验,蛋白是外源性的,不是组织表达的,RT和组化都不用做。

        本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你,都可以成为师兄的好伙伴

        师兄微信号:shixiongcoming

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