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        肝细胞培养实验

        相关实验:上皮细胞类培养实验

        最新修订时间:

        原理

        肝实质由大量肝细胞和少量间质组成,人胎儿、成人和动物的肝脏皆可用于培养;肝脏具有取材方便和易于生长的优点,能获得典型上皮细胞培养。肝细胞形态规整,有多种功能并具有代谢活化致癌物的能力,适用做多种研究;我国已建有多个人肝癌细胞系。

        材料与仪器

        实验材料
        试剂、试剂盒
        仪器、耗材

        步骤

        一、初代组织块培养

        肝组织做组织块培养效果很好。取新鲜肝脏,先剥除被膜和血管等纤维成分,用刀或剪刀把肝剪成1 mm3左右的小块,采用贴壁培养法。肝组织易于贴壁,生长力好,一般次日即可出现生长晕。

        二、初代消化法培养
         
        1.  把肝组织切成2~4 立方毫米的小块,用不含钙镁的BSS液洗两次。

        2.  移入1:1 的0.1 %胰蛋白酶和0.1 %胶原酶(都用无钙镁BSS配制)中,4 ℃冷消化10~12 小时后,通过250 微米和64 微米尼龙网或不锈钢纱网滤过(用纱布滤过亦可)。

        3.  收集细胞、BSS液洗1~2 次、计数、接种培养。

        消化培养肝细胞的另一种方法是灌流法:肝脏灌流需用全肝,以较小动物如小鼠和大鼠为好。

        1.  无菌解剖动物,取出肝脏,先用BSS洗除血污。

        2.  取5 ml注射器一支,吸取消化液后,把注射器头轻轻插入肝管中,用线绳结扎牢固,以防消化液漏出,轻轻把消化液注入胆管系统,并不时轻柔压肝脏,以便消化液进入肝小叶中;消化液在肝内停留20~30 分后,在吸出消化液的同时并轻柔压肝脏,以使肝细胞脱落和消化液吸出。

        3.  待吸净消化液后,注入离心管中,低速离心分离,用RPMI1640培养基培养(较其它培养基为好),能获得较纯的肝上皮细胞和获较好的效果。
         
        三、传代培养
         
        待细胞生长连接成片后,用BSS洗一二次,加1:1的0.025 %胰蛋白酶和0.02 %EDTA混合消化3~5 分钟,待细胞回缩,便停止消化,弃掉消化液、用BSS洗一二次,注入营养液、吹打、制成细胞悬液、再接种培养。

        来源:丁香实验

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