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        实验73 从事物种子萌发时淀粉酶活性的测定

        互联网

        1750

        实验73 从事物种子萌发时淀粉酶活性的测定

        原理

          种子中的贮藏物质淀粉,在萌发过程中,主要是在淀粉酶水解作用下转变成简单的有机化合物,这些物质是构成新器官的材料。在一定条件下定量淀粉糖化过程时间的长短即可表示酶活力的大小。

        仪器药品

          天平 恒温水浴锅

          研钵 白磁板

          漏斗 漏斗架

          培养皿 滤纸

          1%淀粉溶液 0.2mol/L磷酸缓冲液,pH6

          (见附表2)

          I—KI溶液:

          1.原碘液:I2 11g,KI22g,定容至500ml。

          2.标准稀碘液:取原碘液15ml,加K18g定容至500ml。

          3.比色稀碘液:原碘液2ml加KI20g,定容至500ml。

          标准糊精:称取0.12g糊精,悬浮于少量水中,再移至沸水中,冷却定容至200ml,取其中1ml加3ml标准稀碘液作为比较颜色。

        操作步骤

          1.实验材料的准备

          于实验前6天,采用水培法培养出几种不同环境条件下生长的作物幼苗(水稻、小麦)

          2.淀粉酶溶液的制备

          将不同幼苗用水洗净,各称取幼苗胚乳部分0.5g,分别置于研钵中,加5ml pH6的磷酸缓冲液,仔细研磨,滤纸过滤(或离心),用适量缓冲液冲洗,最后定容至10ml。

          3.保温糖化

          取20ml 1%淀粉液和5ml pH6的磷酸缓冲液于三角烧瓶中,置于35℃水浴中平衡15分钟,加1ml制备好的酶溶液,搅匀,立即记时间。

          4.显色、观察及测定

          吸上述混合液1滴于白瓷反应板上,加1滴稀碘液,观察颜色,与标准糊精比较颜色,相同即是反应达到终点,记录糖化时间t。

          f为稀释倍数(20)。

          Ua 为酶活力单位(表示每g材料每小时消化1g淀粉的酶活力为1个单位)。

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