• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        点赞
        收藏
        wx-share
        分享

        博士德ELISA试剂盒一般操作流程

        互联网

        10807

        相关专题

        ABC和TMB显色液

        已稀释好的ABC和TMB显色液在加入酶标板孔前都应预先在37℃中平衡至少30分钟。试剂或样品稀释时,切不可忘记混匀。每次检测都应该做标准曲线。用户须估计样品待测因子的含量,决定适当的稀释倍数。

        1. 确定本次检测所需的已包被抗体的酶标板孔数目,并增加1孔作为TMB空白显色孔。总数=样品数+9;做双份检测时×2。其余重包装好放如冰箱中。

        2. 将1000pg/ml ,500pg/ml,250pg/ml,125pg/ml,62.5pg/ml,31.3pg/ml,15.6pg/ml的标准品各0.1ml依次加入一排7孔中,1孔只加样品稀释液的作为零孔。对于人血清、血浆、体液、组织匀浆或细胞培养上清,直接加已用样品稀释液稀释的样品100μι。

        3. 酶标板加上盖,37℃反应90分钟。

        4. 反应后用自动洗板机吸去酶标板内的液体;或甩去酶标板内液体,再对着吸水纸拍几下。不洗。

        5. 将准备好的生物素抗人IL-2抗体工作液按每孔0.1ml依次加入。(TMB空白显色孔除外)。37℃反应60分钟。

        6. 0.01M TBS或0.01M PBS洗涤3次,每次浸泡1分钟左右。

        7. 将准备好的ABC工作液按每孔0.1ml依次加入(TMB空白显色孔除外)。37℃反应30分钟。

        8. 0.01M TBS或0.01M PBS洗涤5次,每次浸泡1-2分钟左右。

        9. 按每孔90μι依次加入已在37℃平衡30分钟的TMB显色液,37℃避光反应8-12分钟(注意:显色时间供参考,因用户实验室条件差异,最佳显色时间会有所不同。此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色,后3-4孔差别不明显)。

        10. 按每孔0.1ml依次加入TMB终止液,此时蓝色立转黄色。

        11. 用酶标仪在450nm测定O.D.值。显色的程度通过ELISA酶标检测仪测定光密度(OD:optical density)记录。通过细胞因子的标准蛋白做已知浓度系列稀释,测出OD值后绘制出标准曲线,根据标准曲线可推算出标本中细胞因子的含量,一般使用计算机软件可以很快得到结果(博士德网站有下载)

        有两种设定空白对照的方案:

        (1)将TMB空白显色孔设为对照。所有的标准品和样品的吸光值减去零孔的吸光值后,在坐标纸上画出曲线,以吸光值作为纵坐标,以浓度作为横坐标。

        (2)将零孔设为对照。得到的数据可以直接在坐标纸上画出曲线。

        12. 根据样品的吸光值在坐标上找出对应的浓度。应记住由于样品稀释了N倍,其实际浓度应该×N。

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序