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        苏木素-伊红染色法

        互联网

        19460

        HE切片应该是红蓝相映,层次浓淡均为分明。

        一、石蜡切片苏木素一伊红染色法的基本步骤:

        脱蜡
        (1)二甲苯I 15分钟

        (2)二甲苯II(应完全透明) 10分钟

        逐级降浓度酒精水化
        (3)无水酒精I(变为不透明) 1-2分钟
        (4)无水酒精II 1-2分钟
        (5)95% 酒精 1-2分钟
        (6)80% 酒精 1-2分钟

        (7)自来水洗 片刻

        染色
        (8)蒸馏水 片刻
        (9)苏木素液染核 10—15分钟
        (10)自来水洗 片刻
        (11)1%盐酸酒精分化 0.5—1分钟
        (12)流水冲洗 片刻至数小时
        (13)碳酸锂饱和水溶液反蓝 1分钟
        (14)流水冲洗 15分钟至数小时

        (15)复染 0.5%伊红水溶液(对比染色) 2—5分钟

        逐级升浓度酒精脱水(若为醇溶伊红可直接人90%酒精)
        (16)自来水洗(分化伊红) 片刻
        (17)95%酒精I 1-2分钟
        (18)95%酒精 II I—2分钟
        (I9)无水酒精 I 1—2分钟

        (20)无水酒精II l-2分钟

        透明
        (21)二甲苯I 5—10分钟
        (22)二甲苯II 5—10分钟

        可作透明度试验:在黑色背景下以光线照于切片如果见有乳白色斑片系脱水不足,需 再行脱水。

        封固
        (23)盖玻片下封固

        结果:胞核呈蓝色,胞浆呈红色,红细胞呈桔红色,其它成分呈深浅不同红色。

        二、染色过程中的加热

        为了缩短某些程度的染色时间,通常可用加热的方法来实现。一般是将切片或涂片浸在染色液内,连同染色皿置于37℃或56℃温箱内至所需时间。

        有的染色需用煮沸或近于煮沸的技术,可将染色液在 试管 内煮沸后倾在载玻片上;或在注满染液的载玻片下面直接加热,直接加热会因溶剂蒸发而使染色剂发生沉淀。这可在倾人染色剂以前在切片上覆盖一块方形 滤纸 束加以防止。染色完成后冲洗切片时可以很容易地除掉 滤纸 而又不会损伤切片。

        三、染色时应注意事项

        一张优质的HE染色切片,绝非仅指染色而言,它包括很多方面,首先应重视“固 定”环节,其次注意脱水、透明、组织浸蜡,包埋和切片等各个步骤。一张因固定、脱水等步骤有所缺陷的切片,染色是不可能鲜艳、透明、层次分明的。解决上述各细节问题的方法已在前面各章节中均提到过。但在进行HE染色时还应注意以下问题:

        1.组织切片的脱蜡步骤应彻底,否则无论进行那种染色都会发生困难。脱蜡时间要充分,若溶蜡剂使用过久应及时更换以免效率降低,若室温过低,可将溶蜡剂置于温箱中进行脱蜡。

        2.苏木素染液使用一段时间后表面易出现亮晶状飘浮物,这可能是液体表面的过氧化物,必须过滤除去,以防沉渣污染组织切片。苏木素液一般染过三、四百张切片后,着色力会减弱,着色不鲜艳,呈灰蓝色时应及时更换新液。

        3.染色的时间长短需依据:染剂对组织的染色作用,室温条件,切片厚薄,固定液的类别,染液的新旧而进行调节。所以在染色时必须使用显微镜观察染色程度以利掌握时间。

        4.分化十分重要。分化步骤的准确也是染色成败的关键,若分化失当则必然引起染色不匀或过淡,过深等现象,因此分化后一定要镜检,观察胞核是否清晰,胞浆呈淡白色。否则需再次分化,不然一旦复染后,组织会呈紫蓝色即“蓝盖红”现象。

        5.还原液不宜过浓,若碱性太强易使组织脱落故以淡为宜。

        6.伊红宜淡染,复染过深胞核会不清晰,影响镜检。

        7.若脱水,透明等步骤不够彻底,则组织表面会有一层雾状膜。若有这一现象,应立即更换纯酒精脱水,再次透明。在潮湿的季节里应注意酒精的浓度、若降低要及时更换。

        8.染色后的组织切片、要将组织四周的污染物痕迹擦掉,以免影响美观。

        9.封固剂要适量,滴加时应小心倾滴,盖玻片要轻轻放置,以免气泡产生影响镜检。盖玻片大小选择要合适,一般要大于组织块,以防封盖不全,盖玻片要放正,标签贴牢,编号清楚。从而保证切片的封藏和美观。

        10.染好的切片应妥为保存,更应避免日光照射,否则切片容易褪色。

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