- ￥500
- 双向电泳的主要步骤，第-项电(IEF) ，胶条平衡，第二项电泳SDS-APGE.
- 2025年12月03日
企业认证
相关产品推荐更多 >
万千商家帮你免费找货
0 人在求购买到急需产品
- 详细信息
- 询价记录
- 文献和实验
- 技术资料
- 提供商：
上海研谨生物
- 服务名称：
蛋白双向2D-WB电泳代做实验
服务名称: 蛋白双向2D-WB电泳实验服务
规格: 实验服务
价格： 500元
收费标准/服务周期/提供结果:
欢迎咨询详谈，我们会根据您的方案及需求制定详细的服务协议。
更多实验技术服务请浏览网站其他内容,或来电详询!
蛋白双向2D-WB电泳实验服务
实验技术简介
2D-WB是双向电泳与传统western blot结合而成的一项技术。一般实验流程 为抗原蛋白混合物先经双向电泳分离,然后将凝胶蛋白转印至支持膜上，再通过抗体杂交显色。2D-WB技术可以检测到抗原等电点或分子量发生的微小变化，在蛋白翻译后修饰的研究中有很好的应用;而2D-WB结合质谱鉴定技术，可以从蛋白混合物中找到免疫原性更强的抗原。
2D Westerm blot概述
2D-WB是双向电泳与传统western blot结合而成的一项技术。一般实验流程 为抗原蛋白混合物先经双向电泳分离，然后将凝胶蛋白转印至支持膜上，再通过抗体杂交显色。2D-WB技术可以检测到抗原等电点或分子量发生的微小变化，在蛋白翻译后修饰的研究中有很好的应用;而2D-WB结合质谱鉴定技术，可以从蛋白混合物中找到免疫原性更强的抗原。
2D Western blot技术服务内容
1、蛋白质抽提与定量;
2、双向电泳;
3、转膜，封闭，孵育,显示成像。
实验操作流程
1、第--项电泳(IEF) ,胶条平衡，第二项电泳SDS-APGE.
2、第二项电泳结束后，取出凝胶进行转膜，转膜方法可选择湿法转移和半干法转移。常用的膜是NC膜和PVDF膜。
3、封闭，5%脱脂奶粉或5% BSA封闭1小时(室温)或过夜(4度)。
4、一抗孵育,根据抗体说明书选择孵育时间，常规的孵育条件是室温1小时或4度过夜，一抗孵育后取出膜
TBST洗涤3次，每次5分钟。
5、二抗孵育:根据一抗选择合适的二抗(抗鼠、抗人、抗兔等)，室温孵育1小时后取出膜TBST洗涤3次,每次5分钟。
6、显影:将A、B底物按比例稀释混台均匀后滴在膜上，暗室中将胶片置于膜上,盖上压片夹,曝光一定时间后将胶片放入显影液中进行显影，直到出现清晰的蛋白质条带，清水漂洗一下后在定影液中定影， 曝光时间需综台考虑蛋白质的上样量，抗体稀释浓度，抗体孵育时间等因素。
7、定影后，清洗胶片，晾干，标定marker,扫描图片和2D Western blot图片分析。
送样须知，为了保证2D Western blot技术服务能顺利进行,样品寄送需满足以下要求:
1、顾客提供:组织、细胞、蛋白质溶液等; 一抗(可交由研谨公司代购)。
2、运输要求:干冰或液氮包装寄送。
注:样本应避免各类污染和反复冻融。
2D Western blot技术服务报告内容
1、蛋白质定量结果及电泳上样量;
2、原始胶片、电子图片及图片分析结果;
3、2D Western blot完整的实验报告，包括实验步骤、使用仪器和试剂等。
附: 2D Western blot实验步骤
1、2D Western blot蛋白质样本制备,制备的主要原则是尽可能溶解全部蛋白质，破坏蛋白质与蛋白质间的相互作用，避免各类干扰物质，样品制备与IEF兼容等。
2、双向电泳的主要步骤，第-项电(IEF) ，胶条平衡，第二项电泳SDS-APGE.
3、第二项电泳结束后，取出凝胶进行转膜，转膜方法可选择湿法转移和半干法转移。常用的膜是NC膜和PVDF膜。
4、封闭， 5%脱脂奶粉或5% BSA封闭1小时(室温)或过夜(4度)。
5、-抗孵育,根据抗体说明书选择孵育时间，常规的孵育条件是室温1小时或4度过夜，一 抗孵育后取出膜TBST洗涤3次，每次5分钟。
6、二抗孵育:根据-抗选择合适的二抗(抗鼠、抗人抗兔等)， 室温孵育1小时后取出膜TBST洗涤3次，每次5分钟。
7、显影:将A、B底物按比例稀释混合均匀后滴在膜上,暗室中将胶片置于膜上，盖上压片夹，曝光一定时间后将胶片放入显影液中进行显影，直到出现清晰的蛋白质条带，清水漂洗一下后在定影液中定影， 曝光时间需综合考虑蛋白质的.上样量，抗体稀释浓度，抗体孵育时间等因素。
8、定影后，清洗胶片，晾干，标定marker,扫描图片和2D Western blot图片分析。
实验代做服务：
风险提示：丁香通仅作为第三方平台，为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全，合理判断，谨慎选购商品，商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品，请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
- 作者
- 内容
- 询问日期
文献和实验liteng1117 求助: 构建好了重组腺病毒进行蛋白表达，分子量是14kd，5%的浓缩胶70v，12%，或15%的分离胶110v，跑90min。湿转：100v，90min。封闭用5%的脱脂奶粉，封闭3h（因为背景深，以为封闭久会好些）。一抗1:3000，4度过夜，二抗1:5000，孵育1h，洗膜都是用TBST漂洗15min ×4次。但是显影后背景特别深，虽然可以看见目的条带，但还是有一些非特异性的条带出现，不知道是封闭出问题还是一抗浓度过高。
【目的和要求】 1、 学习和掌握蛋白质双向电泳的基本原理和方法。 2、 了解双向电泳技术在蛋白质组学研究中的应用。 【实验原理】 蛋白质的双向电泳的第一向为等电聚焦（Isoelectrofocusing,IEF）,根据蛋白质的等电点不同进行分离；第二向为SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE），按亚基分子量大小进行分离。经过电荷和分子量两次分离后，可以得到蛋白质分子
Rachel1123 求助各位高手，RIPA裂解液提取的蛋白可以用于做STAT3的wb吗？还是需要专门提取核蛋白？ 多谢！ 顺便再问一句，stat3在胃癌细胞SGC7901中是否高表达？ wangfanyun RIPA裂解液可以做stat3的WB。不需要专门提取核蛋白！ zfyyzz00 一般来说，stat是转录因子，只有磷酸化的stat才有活性，它通过形成二聚体的形式进入
技术资料暂无技术资料 索取技术资料
