材料与仪器
步骤
试验步骤:
1)将两种显色底物1:1等体积混合(一般各1ml/membrane)。
2)将混合物覆盖在膜表面,1-2分钟,摇晃使均匀。
3)用保鲜膜把膜包起来,放入夹板中。
4)在暗室中将X光片,覆盖在膜的上面,夹好夹子,曝光1min。
5)显影、定影。
6)根据结果调整曝光时间和曝光区域,得到最佳结果。
注意:荧光在一段时间后会越来越弱。
2.DAB显色
DAB(3,3二氨基联苯胺)和HRP反应产生棕色的不溶终产物。这种棕色沉淀不溶于酒精和其它有机溶剂,对于必需使用传统复染和封固介质的免疫组化
对于AP标记的二抗我们选用BCIP and NBT 显色,它们在碱性磷酸酶(AP)作用下反应可生成一种不溶性黑紫色沉淀的强信号。
来源:丁香实验