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        细菌生化试验——石蕊牛奶试验

        海博生物

        14154

        一、试验原理

        石蕊既是 pH 指示剂,又是氧化还原指示剂,在酸性溶液(pH 4.5)呈红色,在碱性(pH 8.3)呈蓝色,培养基本色应为紫蓝色(pH 6.8)。石蕊又可被某些细菌还原成无色母体。

        牛奶含有乳糖和三种主要蛋白质,即酪蛋白、乳蛋白和乳球蛋白。

        引起牛奶凝固主要是细菌含有凝乳酶,它可使酪蛋白转化成副酪蛋白,或因乳糖发酵产生大量酸使酪蛋白沉淀所致。

        有些细菌产生脂酶,可分解牛奶中的脂肪,形成黄色透明液体。

        有些细菌具有酪蛋白水解酶,可催化酪蛋白水解,最终转化成透明液体的酪蛋白原沉淀物,这个过程称为蛋白胨化。

        二、培养基

        脱脂奶粉 100.0 g

        石蕊 适量

        水 1000.0 mL

        将奶粉充分溶化于水中,调至 pH 6.8,加入石蕊溶液直到呈现紫蓝色(pH 6.8),分装试管,每管约 5 mL。于 115℃ 灭菌 10 min,迅速冷却,放冰箱中备用。

        石蕊溶液配制法:称取石蕊 2.5 g,放入钵中研碎,移放于盛有 40% 乙醇水溶液 50 mL 的烧瓶中,煮沸 1 min,静置约 10 min,吸取上清液移入另一烧瓶中,再加 40% 乙醇水溶液 50 mL 于原烧瓶中,再煮沸 1 min。

        将上清液加于前上清液中,将两次上清液混合均匀,离心沉淀,将上清液倒入 100 mL 量筒中,用 40% 乙醇补至 100 mL,滴加 1 M 盐酸直至溶液呈现紫色,即为 2.5% 石蕊溶液。

        95% 乙醇 42.1 mL 加水至 100 mL 即为 40% 乙醇溶液。

        三、试验方法

        以待试菌 18~24 h 培养物接种,若为厌氧芽孢杆菌,应在培养基管中加入无菌铁屑或铁钉等,并加无菌凡士林等覆盖,置 36±1℃ 培养 1-14 天。

        四、试验结果判断

        1. 粉红色:乳糖被发酵产酸;

        2. 紫蓝色:乳糖为被发酵,保持原色;

        3. 蓝色:碱性反应,乳糖为被发酵,细菌分解培养基中含氮物质,产生碱性物质;

        4. 白色:石蕊被还原;

        5. 澄清:牛奶蛋白被消化(胨化);

        6. 凝块会成凝乳:因大量产酸,牛奶蛋被被凝固;

        7. 产气:乳糖被分解产酸产气,强烈发酵可破坏凝块。

        五、说明

        如无脱脂奶粉,可将新鲜牛奶放冰箱过夜,除净上面的奶油层,将脱脂奶置于流动蒸汽加热灭菌 1 h,冷却到小于 10℃,以灭菌纱布过滤,加石蕊溶液至淡紫色为止,分装试管,灭菌同前。


        作者:张辉

        本文章内容版权归海博生物所有,未经授权不得转载。

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