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        滤膜法测定水中大肠菌群

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        滤膜法测定水中大肠菌群

          一、目的要求

          学习使用滤膜法测定水中大肠菌群。

          二、基本原理

          滤膜法是采用滤膜过滤器过滤水样,使其中的细菌截留在滤膜上,然后将滤膜放在适当的培养基上进行培养,大肠菌群可直接在膜上生长,从而可直接计数。所用滤膜是一种多孔硝化纤维膜或乙酸纤维膜,其孔径约0.45μm。

          三、器材

          伊红美蓝琼脂平板或远藤氏琼脂平板,乳糖蛋白胨发酵管内有倒置小套管),灭菌水,河水或湖水;

          灭菌过滤器(漏斗、基座、带有孔橡皮塞的抽滤瓶分别灭菌,可用高压蒸汽灭菌),镊子,夹钳,真空泵,滤膜,烧杯等。

          四、操作步骤

          1.滤膜灭菌

           将滤膜放入装有蒸馏水的烧杯中,加热煮沸15分钟,共煮沸三次,前两次煮沸后换水洗涤2—3次再煮,以洗去滤膜上残留的溶剂。

          2.滤膜过滤器装置

          用无菌手续将已灭菌的过滤器基座、滤膜、漏斗和抽滤瓶按图ⅪⅤ-2装配好,其中滤膜用灭菌镊子(浸在95%酒精内,用时通过火焰灭菌)移至过滤器的基座上。其他可直接用手或夹钳操作,但不要碰到伸入抽滤瓶的橡皮塞部分,以免染菌。

          3.将抽滤瓶接上真空泵。

          4.加水样过滤

          直径35mm的滤膜,所过滤的水量以培养后长出的菌落数不图ⅪⅤ-2滤膜过滤器装置多于50个为适宜。一般清洁的深井水或经处理过的河水与湖水等可取样 300—500 ml;对比较清洁的河水或湖水,可取样1-100ml;严重污染的水样可先进行稀释;未知的水样可做三个稀释度,选择菌落数合适的稀释度进行计算。本次实验于过滤器漏斗内加入比较清洁的河水或湖水100ml,加盖。

          5.开动真空泵进行油滤。

          6.抽完后,加入等量的灭菌水继续抽滤,目的是冲洗漏斗壁。

          7.滤毕,关上真空泵,用灭菌镊子取滤膜边缘,将没有细菌的一面紧贴在远藤氏琼脂平板或伊红美蓝琼脂平板上。滤膜与培养基之间不得有气泡。

          8.将平板倒置于37℃下培养22—24小时。

          9.挑取符合大肠菌群菌落特征的菌落,进行革兰氏染色、镜检。

          10.将镜检为革兰氏阴性、无芽胞杆菌的菌落再接种一支乳糖蛋白胨发酵管,经37℃培养 24小时,产酸又产气者即为大肠菌群阳性。

          11.计算

          1升水样中的大肠菌群数

          =滤膜上的大肠菌群菌落数×10

          五、实验报告

          1.结果

          一升水样中的大肠菌群数是多少?

          2.思考题

          滤膜法检查大肠菌群有什么优点?

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