• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        点赞
        收藏
        wx-share
        分享

        总糖和还原糖的测定——斐林氏法

        互联网

        16356

        总糖和还原糖测定方法较多,如3,5—二硝基水杨酸法、碱性铜试剂法、蒽酮比色法、斐林氏法等。这里只介绍斐林氏法。

        一、目的

        学习掌握生产实践中常用的快速定糖方法。

        二、原理

        还原糖在碱性溶液中能将Ag + ,Hg + ,Cu 2+ ,Fe(CN) 3- 等金属离子还原,而糖本身则氧化成各种羟酸,利用这一特性可以对还原糖进行定量测定。本实验采用斐林试剂热滴定法,氧化剂是斐林试剂,它是由甲乙两种溶液组成,甲液中含有硫酸铜、次甲基蓝;乙液中含有氢氧化钠、酒石酸钾钠和亚铁氰化钾(黄血盐)。当甲乙两液混合时,硫酸铜和氢氧化钠作用形成氢氧化铜沉淀,由于溶液中存在酒石酸钾钠,它和氢氧化铜形成了可溶性络合物。

        酒石酸络铜(Ⅱ)钾钠盐在与还原糖共热时,二价铜离子即被还原成一价的氧化亚铜红色沉淀。

        此氧化亚铜与试剂中亚铁氰化钾反应生成可溶性的亚铁氰酸络铜(Ⅰ)钾盐。

        Cu 2 O + K 4 Fe(CN) 6 + 3 H 2 O →K 2 Cu 2 Fe(CN) 6 + 2 KOH + 2 H 2 O

        亚铁氰化钾 亚铁氰酸络铜(Ⅰ)钾盐

        斐林试剂中二价铜的还原力比次甲基蓝强,因此所滴入的标准葡萄糖溶液首先使二价铜还原,只有当二价铜被还原完毕后,才能使次甲基蓝(甲烯蓝)还原为无色,测定中以此作为滴定终点。

        在测定时先做一对照管(不加样品),用标准葡萄糖滴定求知一定体积斐林试剂中二价铜和次甲基蓝的量,即测定对照管消耗的标准葡萄糖量(A)。再做样品管,样品中还原糖消耗斐林试剂中一部分二价铜,剩余的量再用标准葡萄糖来滴定,即样品消耗的标准葡萄糖量(B)。将(A)减去(B)就可求得样品中还原糖量。

        三、器材及试剂

        1.器材

        ①山芋粉 ②广范试纸pH1~12。

        ③吸管5毫升(×4),10毫升(×2) ④容量瓶100毫升(×3)

        ⑤烧杯150毫升(×1),100毫升(×1) ⑥三角烧瓶250毫升(×6)

        ⑦滴定管25毫升(×1) ⑧双孔橡皮塞

        ⑨电炉300W(×1) ⑩天平。

        2.试剂

        ①斐林氏甲液:15克硫酸铜、0.05克次甲基蓝溶于1升蒸馏水中。

        ②斐林氏乙液:50克酒石酸钾钠、54克氢氧化钠、4克亚铁氰化钾溶于1升蒸馏水中。

        ③0.1%标准葡萄糖溶液:准确称取干燥恒重的葡萄糖1.00克,加入少量蒸馏水溶解后,再加8毫升浓盐酸(防止微生物生长),蒸馏水定容至1升。

        ④6mol·L-1盐酸;

        ⑤6 mol·L-1氢氧化钠。

        四、操作步骤

        1.还原糖提取:称取2.00克山芋粉,在小烧杯中先用少量水调成糊状,再加入70毫升水,50℃保温15分钟,取出后定容至100毫升, 经过滤,取滤液进行还原糖测定。

        2.总糖水解:称取1.00克山芋粉在小烧杯中,加6mol·L -1 盐酸10毫升,蒸馏水15毫升,在沸水浴上加热半小时,取出后用6mol·L-1氢氧化钠中和至中性,然后定容至100毫升,经过滤,取滤液10毫升稀释至100 毫升,即为稀释1000倍的总糖水解液。

        3.糖的定量测定:在三角瓶中按下表加入各 试剂 。

        在加入斐林 试剂 甲液和乙液后, 为了保证处于沸腾状态下快速滴定(整个滴定时间在三分钟内完成),在滴定前先从 滴定管 中加入适量的葡萄糖液,然后在沸腾状态下以4~5秒一滴的速度,继续自 滴定管 加入葡萄糖液,直至蓝色消失停止滴定。

        由于还原型的次甲基蓝遇到空气后又能转为氧化型,而恢复蓝色,因此当滴定到蓝色刚消失,出现黄色时应立即停止滴定,如果再现蓝色切勿继续滴定。

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序