• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        点赞
        收藏
        wx-share
        分享

        钙调蛋白的溴化氰裂解实验

        相关实验:钙调蛋白的溴化氰裂解实验

        最新修订时间:

        材料与仪器

        步骤

        材料

        甲酸(市售最髙级(如AldrichChemicalCo.,Inc.)

        纯的钙调蛋白(干粉;无盐(0.1~1 mg)

        溴化氰(CNBr)(晶体)(如AldrichChemicalCo.,Inc.)

        乙腈(如Burdick&Jackson或J,T.Baker)

        操作程序

        本操作程序是根据Gross和Witkop(1962)的文献修改而成的。

        1)用水稀释甲酸至终浓度为70%(w/v)。对于>99% 的甲酸,用 2.1 ml 甲酸和 0.9 ml 水。对于 88% 的甲酸, 用 2.lml 甲酸和 0.54 ml 水。

        2) 将钙调蛋白溶于 70% 甲酸溶液,终浓度1mg/ml, 置冰上。

        3) 称重 1.5-ml 具盖聚丙烯离心管。戴手套,于通风橱中,打开 CNBr 瓶,将一小粒晶体移至预称重的离心管中。盖好离心管和 CNBr 瓶。称重装有 CNBr 的离心管,减去离心管重,算出 CNBr 的重量。

        4) 将 CNBr 溶于乙腈,终浓度力 6md/L(0.64 g/ml)。记住,应戴手套且只能在通风橱屮打开离心管。

        5) 加一等分 CNBr 溶液于钙调蛋白。该等分中 CNBr 的含量应超过钙调蛋白中预期甲硫氨酸残基总摩尔量的 400 倍。

        6) 盖紧离心管,彻底混匀。用箔包住离心管避光。室温下,反应混合物于通风橱中孵育 22 h。

        7) 于反应混合物中加入等体积的纯水。样品经真空离心至干。然后再将样品重溶于 0.1%(w/v) 三氟乙酸,供 HPLC 或质谱分析。

        来源:丁香实验

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序