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        疏水层析中酯类与疏水性强蛋白的分离

        互联网

        3091

        问:小试的时候用预装柱摸索好的纯化方法:

        缓冲液(1):上样平衡缓冲液,PBS+0.8M 硫酸铵

        缓冲液(2):清洗杂蛋白缓冲液,PBS+0.3M 硫酸铵

        缓冲液(3):Tris-HCl pH9.0 0.1M

        phenyl FF(high sub)疏水柱,收率与蛋白质性质都可以达到要求。在放大时候,就发现用Tris-HCl pH9.0 0.1M洗脱不下来我的目的蛋白,然后我改成用水洗脱,可以洗脱下我的蛋白,但是由于发酵产品产量的增加,现在洗脱峰中出现了酯类,就是蛋白与酯类在同一峰中出现.

        虽然可以在不同的收集管中(目的蛋白现出来,然后紧接着就是有浊度的酯类),但是我的目的蛋白还是有微微的浊度,40度加速过夜,就能看见很明显的浊度,我用搞浓度的TritonX-100可以将其溶解.

        但是我的产品不能有很高浓度的TritonX-100,原来我设想用低浓度的TritonX-100作为洗脱液中的添加剂,想使目的蛋白和酯类分开,但是忘记了TritonX-100在280有吸收,所以不可取。

        现在我想使酯类与疏水性强蛋白分开,还是要使用我现在填料,大家有什么好的建议吗?

        答:浑浊部分检测肯定是脂类吗?我觉得在水中蛋白溶解不好,特别是高浓度的容易出现乳浊状的,如果确实是脂类,可以把条件改为100-20mM硫酸铵,这样应该有个浓度能把蛋白和脂类分开,如果你小试没问题的话。

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