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        瘤细胞的GFP转染问题

        互联网

        4140

        qdshlyykqk:我是新手,正在进行肿瘤细胞的GFP转染,有些问题想请教大家。因为在网上看到大家众说纷纭,一时拿不定主意。

        1、利用转染之前的细胞进行G418筛选来确定最佳筛选浓度,是以1周还是2周完全杀死细胞为标准?有人说以1周的浓度作为将来转染之后的快速筛选阳性细胞的浓度,在对照组的为转染细胞大部分或全部死亡之后,以上述2周时的浓度作为维持浓度。有人说维持浓度应该是筛选浓度的1/2。究竟有没有一个标准,或者怎样做才算是比较标准和可靠的依据。

        2、如果我以24获96孔板铺板,在进行转染之前的最佳浓度确定时,各板每孔加入的细胞数量以多少比较合适?24孔板和96孔板有没有什么太大的区别?

        3、再进行G418浓度梯度设定时,以多少递进比较合适?50μg/ml?100μg/ml?

        谢谢大家的指教!祝各位老师工作顺利!

        丁香园网友xiongcy1984认为:

        我是以10天左右使细胞死光作为筛选浓度,等筛出稳定细胞株后将浓度减半作为维持浓度。

        对于铺板的问题,对不同的细胞所需要的密度不一样,建议作一个梯度,找一个最佳的密度。

        G418我用的浓度为400μg/ml,100μg/ml 太低了吧?

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