• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        点赞
        收藏
        wx-share
        分享

        细胞的冻存实验(细胞的冻存实验)

        相关实验:细胞的冻存实验

        最新修订时间:

        简介

        细胞的冻存实验是指对体外培养的细胞通过加入液氮进行保护。以维持其各种生物特性,减少培养器皿、培养液等的消耗。

        原理

        细胞的冻存实验的基本原理是利用液氮的低温特性以及二甲亚砜(DMSO)或甘油这两种无毒性的物质进入细胞中,使细胞内冰点下降,并可提高细胞膜对水的通透性,配合以缓慢冷冻的方法,可使细胞内的水分逐步地渗透出胞外。

        材料与仪器

        器材:
        ① 培养的贴壁细胞(70%~80% 融合)
        ② 离心管
        ③ 吸管
        ④ 冻存管
        ⑤ 离心管
        ⑥ 液氮罐
        ⑦ 超净工作台
        试剂:
        ① 0.5% 胰蛋白酶
        ② 冻存液
        ③ 液氮

        步骤

        细胞的冻存实验基本过程可分为以下几步:
        A. 依照传代的方法用 0.25% 胰蛋白酶液对处于对数生长期的单层细胞进行消化。
        B. 收集消化细胞于离心管中,800~1000 r/min 离心 5 min。
        C. 弃上清液,加入适量冻存液,用吸管吹打细胞制悬,调整细胞密度为 5 x 106~1 x 107 个/ml。
        D. 每个冻存管分装细胞悬液 1 ml,旋紧冻存管的盖,并用蜡膜封严。
        E. 在冻存管上标明细胞的名称、冻存时间、冻存人名等。
        F. 将冻存管置于如下条件下逐步加以冻存:4 ℃,1 h→- 20 ℃,2 h→- 85 ℃,2 h→液氮。

        注意事项

        1. 对数期的细胞增殖能力强,冻存后生存率较高,因此,在进行细胞冻存时,应尽量选择处于此期的细胞加以冻存。
        2. 为了保证冻存的质量及复苏后细胞的存活率,冻存时应掌握好消化时间,消化过度将对细胞造成损伤,复苏时细胞难于存活。此外,复苏后接种时,细胞的浓度不能太低,最好控制在 5x106~1 x 107 个/ml,这样才能保证复苏成功。
        3. 冻存管的瓶盖应封盖严密,以免复苏时细胞外溢;对一些冷冻耐受性较差的细胞,如胚胎细胞,冻存时应特别小心,可在冻存管外包裹一层棉花,以避免冻存过程中细胞受到损伤。

        来源:丁香实验

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序