Liquid-overlay培养

1 介绍用于生产治疗性重组蛋白的哺乳动物补料批次细胞培养物的性能和产量取决于细胞对变化的培养环境的反应。广泛报道的一种提高哺乳动物细胞生产力的策略是基于在高渗条件下培养细胞的。例如，通过加入无机或有机渗透剂（如 NaCl 或山梨糖醇）来增加渗透压。但是，细胞比生产率的提高与细胞生长的降低相结合，通常不会在产品产量方面带来整体收益。双相分批培养或逐渐增加渗透压、渗透保护成分和随后的继代培养已被成功地用于克服细胞生长抑制的 ...

我们可能都有过这样的经历：辛苦呵护的细胞，怎么也不愿意贴壁；贴壁了又很容易成块或者成团掉下来；原本贴壁的细胞，复苏后细胞不贴壁了；........遇到这样的问题你都如何解决？这次我们就来聊聊，为啥你的细胞为这么矫情，不愿贴壁呢？体外培养细胞贴壁与什么有关？首先并不是所有的细胞在体外培养的情况下都会贴壁，但大部分来自实体组织器官的细胞都会贴壁。贴壁的过程可能是这样的：细胞首先分泌细胞外基质，这种细胞外基质黏附在支持物的表面 ...

我养细胞有 8 年历史了，现在我的细胞已成为大家参观和崇拜、学习的对象。好的经验要分享，这就将我这几年来养细胞的经历和感想跟大家交流一下。启蒙老师的重要性一般进实验室都有师兄师姐带着做，他们就是你做细胞的启蒙老师。他们的操作手法、细节、理论讲解就成了你操作的准则，如营养液、细胞瓶的摆放位置；灭菌处理程序；开盖手法；细胞吹打手法等等。要学会他们的正确操作，在第一次的时候就要重视。好细胞要及时保种细胞要分批传代，这样即使有一批 ...

很多小伙伴在养细胞的时候，总是会出现这样或那样的问题，很多时候，那是因为你没有注意以下的细节问题，现在我们一起来看看：细胞培养前的准备在您带上手套开始细胞培养之前, 先检查一下移液管和瓶子的数量是否充足, 以免在开始实验后再次出入操作台，这样可以降低细胞污染的风险。细胞培养基也应先预热, 选择只预热部分培养基而非整瓶加热, 不但可以节约实验时间, 而且可以避免因反复加热培养基而造成的蛋白质降解。结束操作后, 别忘了培养基对光敏感, 应尽可 ...

在细胞培养中常可见到培养液中出现大小不等、形态不同的黑色颗粒。只要这种黑色颗粒一出现，我们的细胞不是停止生长就是陆续死亡。人们常称这种颗粒为「黑胶虫」。听说，这种黑色颗粒还会「游动」？小编想想都鸡皮疙瘩掉一地。难道真的是细胞长虫子了吗？今天我们就来科普一下，这个科研人员这个科研人员闻之变色的「小虫子」到底是 What！Hey！胶虫！你别跑！！不想看长篇大论的亲，小编贴心的提前告诉你们结论——神秘的「Hey 胶虫」，主要来源于培养液 ...

用好的血清，细胞一定状态良好？养细胞细心、体贴像照顾小孩纸，细胞一定「平平安安」？但 MTT 等一些细胞实验结果却异常。因为你的细胞已悄悄被支原体污染了。支原体是一种生命力顽强的细菌，它和其他细菌的区别在于，支原体没有细胞壁，只有柔软的细胞膜。娇小的身材（0.15-0.3μm）让它可以轻松穿过滤器。由于身形小，培养物不会表现出浑浊或其他明显可见的特征，因此支原体很容易被忽视。但支原体其实已经随着操作者的操作「偷偷地」潜入超净工作 ...

市场上的胎牛血清种类繁多，鱼龙混杂，很多科研工作者，特别是刚接触细胞培养的人，难以分辨血清质量的优劣。本人根据十多年来血清生产销售的经验，总结如下：一、外观拿到血清，最先接触的是血清外观，对于缺少细胞培养经验的人来说，外观的判断尤为重要1、颜色根据血红蛋白含量的不同，胎牛血清可表现出黄色或红色，我国的细胞培养用血清标准是不高于20mg/dl，实际上，血红蛋白含量的高低对血清并无直接影响，这个指标的意义在于能体现出采 ...

细胞培养中的污染分为两类，化学污染和生物污染。化学污染化学污染是一些对细胞有毒性的或对细胞产生刺激的化学物质。这些污染一般来自于没有洗净的器皿、不纯的化学试剂和质量较差的蒸馏水等。化学污染中比较引人注意的是细菌内毒素。它是革兰氏阴性细菌细胞死亡后解体释放出的疏水性的细胞壁组成物质，对塑料等疏水性强的物质有很强的吸附能力。细菌内毒素可刺激部分细胞产生一些激素或细胞因子，对细胞生长和实验结果产生影响。细菌内毒素 ...

1. 细胞污染的种类细胞污染一般可分为微生物污染和真核生物污染。其中微生物污染包括真菌和酵母、细菌、支原体等。而真核生物一般是细胞系间的交叉污染。细菌、真菌或酵母的污染很容易辨识，直接可通过培养基颜色变化、显微镜下观察便可判断。如细菌污染后细胞培养基变黄色，而且镜下有小黑点，且有规律的运动。而酵母污染后培养基变紫色，镜下可见透明、且连成一串的圆形。但如果是支原体污染的话，由于最开始支原体生长缓慢，而且显微镜下难以看出， ...

目前市场上的血清品牌五花八门，除了名气最大的 Gibco，Hyclone 之外还有很多其它的进口品牌和国产品牌。价格也高低不一，可以称得上鱼龙混杂，血清的水深的很。很多不法奸商为追逐高额利润，大肆造假，炮制出许多所谓 Gibco，Hyclone 等「原装进口胎牛血清」，甚至很多国家严禁进口的疫区血清或者超级紧俏的血清货号，他们都能提供「大量现货」，坑害广大科研工作者，造成实验失败，毕业延期等恶劣影响。特别是近年来，进口血清紧俏，价格 ...

HUVEC 分离自脐带静脉，一般用于生理学和药理学研究，例如大分子转运、血液凝固、血管发生和纤维蛋白溶解作用。PromoCell 提供取自单个供者的 HUVEC,混合来源的则混合有至多四个不同供者。（Human Umbilical Artery Endothelial Cells （HUAEC） from the same donor are available on request.）此外，根据信号传导研究的不同，可以为血管生成研究和其他依赖 VEGF 的信号通路研究（相 关内皮生长 ...

由于欧盟关于化学物质的毒性风险评估（REACH EC No. 1907/2006）法规的改变，以及目前不断发展的替代方法的需求，以取代动物实验为目标，在体外模型基础上进行肺毒性的评估的技术，显然是非常有必要的。迄今为止，国内外的细胞体外毒性测试实验研究中，仍多采用浸没式细胞培养方法进行。然而，在浸没条件下的颗粒物暴露并不符合在细胞体内的真实情况，并可能影响研究受试物（颗粒物、气体等）的物理化学性质。早在 1999 年，德国 Aufderh ...

1.一体化小室——细胞培养&显微成像两用玻片/皿细胞免疫荧光实验你是怎么做的？还在用小玻片，先泡酸、再晾干、再 coating、再种细胞、染色、最后封片成像？那您太 out 了吧！使用 ibidi 产品，先养细胞、然后直接固定、染色、成像，在培养皿/玻片上全部搞定！绝对能帮您把细胞养好、又帮您省时省力的获得漂亮的成像结果（见图 1）！图 1. 传统爬片方法与 ibidi 产品免疫荧光实验比较2.ibidi 产品底部媲美盖玻片厚度，为高分辨率显微成像而设计的光学特性德国 i ...

亲，你还在为流动状态下的细胞培养而苦恼吗？不要怕，ibidi流体剪切力系统为您提供完美解决方案！通常我们都是在静止状态下进行细胞培养（图1右）。但是在体内，很多细胞都暴露在机械剪切力下（图1左），比如血管内皮细胞。如果您的研究涉及剪切力，或者需要在流动状态下进行细胞培养，那么您关注ibidi流体剪切力系统就对啦！图1. 流动状态、静止状态下进行细胞培养的示意图为什么要在流动状态下进行细胞培养呢？在流动状态下和静止状态下 ...

mhy叶可 大家好，我是新手，第一次养细胞，恳请各位大虾给点关于培养K562以及K562/A02的建议。K562是悬浮细胞吗？还是半贴壁？半贴壁的话应该怎么换液？请各位老师不吝赐教，多谢，多谢。yupingwang 悬浮细胞，离心后去上清，培养基重悬mhy叶可 多谢，以后还要多多请教，呵呵mhy叶可 请教楼上老师，k562/A02耐药细胞株培养时，怎么维持它的耐药性，加阿霉素大约从什么剂量开始加？百迈生物 mhy叶可 wrote:请教楼上老师 ...

tangc233 一直在养骨髓间充质干细胞，年前出现了一次细胞污染，年后我改用进口血清，同时每次配完液（低糖DMEM+10%血清+双抗）后都用滤器过滤一下，最近发现细胞不肯长，甚至之前都贴壁生长的细胞换完液后2天大半都不见了，但还可见一些贴壁细胞（换液前后的培养液配置都是一样的），现在我也不知道问题出在哪里，还请各位高手多多指教！宋丽娟1016 我想，你可以从以下几个方面考虑：1，是不是你的双抗浓度太高了呀2你的细胞是第几 ...

holybible1263 请问体外做hepG-2,体内做H22，有可比性吗？fuxiao29 我个人认为体外做hepG-2实验,体内也应该用同一种细胞系做，这样才有可比性。holybible1263 谢谢，不过HEPG-2没有办法做体内呀，体内要用什么呢？fuxiao29 可以做体内实验呀，你可以将你用的质粒转染到HEPG-2细胞系里，构建稳定细胞系，然后注入动物体内。xiayuxue 据说HepG2很难成瘤本文由丁香园论坛提供，想 ...

chuenshui 细胞株：LS 174T来源：中科院上海细胞库培养基 :DMEM 10%小牛血清问题：刚买回来时传代2次，都没问题。扩大培养时发现，细胞养起来时培养基发紫，0.25%胰酶消化传代，24小时候细胞50%不贴壁，细胞还呈发亮状态。尝试解决办法：更换培养基，10小时后培养基发紫，细胞依然呈漂浮状态。无解决现象。请问有什么办法可以解决，培养箱应该没问题，箱子里有同时培养的其他细胞，无异常现象。布布vs果果 细胞有抱团生长现象吗？s ...

haofeng 无血清培养MDA-MB-468细胞24小时，细胞漂起来，细胞周围出现淡黑色半透明的圈；正常10%血清培养时也有，不知道各位高手，有没有人见过这种情况，有什么建议？hngwzhu 你的所谓的黑圈有没有增多的情况，如果有的话可能是酵母污染！如果没有考虑是不是细胞本身就污染所谓的黑胶虫。drcells 不像是传说中的黑胶虫污染。。。细胞系中这种“污染”比较普遍。特别是对相对生长周期比较长的细胞。和死细胞成正比。它们可大 ...

lesenhower 想到一个问题：体外切断了正常的血供，器官的营养交换取决于简单的灌流。对于血管有畸形的器官，体内会因血供不足发育异常；如果将该器官放在体外培养，由于不依赖血管了，而直接由培养基灌流提供营养，是否就不会存在“血供不足”的问题了，所以反而可能发育正常了？换个说法，对于体外培养的器官，其内部血管是否存在，正常与否还有区别吗？有没有人能给这个问题以确切的答案？谢谢！孤单走着 版主太小气，2叮当，过年啦！整个50叮当。 ...