Elispot技术

1 起源与发展：1983年, Czerki8Dnsky；Sedgwick and Holt:计数 B cells1988年，Czerkinsky: T cell IFN-r1988年，Czerkinsky：双色标记（Dual-Color）1993年，第一台ELISPOT自动分析仪：德国Leica96-97年，出现了新的ELISPOT分析仪2 ELISPOT 和 ELISA的区别：ELISA 回答 “how much”,而ELISPOT回答“What freqency”ELISA是 ...

关于ELISPOT试剂盒: 用Mabteck公司的ALP标记抗体吧，配合Millipore公司的Multiscreen-IP 96孔板，所有的试剂都可以减半，照样可以出非常好的结果，undefined96孔的试剂盒我一直做undefined96孔，但BCIP/NBT显色液没试过减半，因为它很便宜。记得当年第一次做实验就出了很好的结果，经过不断摸索，做出的蓝紫色斑点确实非常漂亮，几乎没有非特异斑点，嗯，ELISPOT是我最拿手的实验之一。关于PBMC: ...

1 预期用途Eli-spot分析是设计用于在单细胞悬液中计数分泌细胞因子的细胞数量的方法。这个方法的优点在于只需在体外进行很少的处理从而使细胞因子产生的分析尽可能接近于体内状况。这个技术用于测定在给予一定刺激的情况下细胞因子产生细胞的数目，以及在某种处理或病理条件下的细胞因子产生细胞的数量。2 主要原理细胞刺激后，原位产生的细胞因子被一种特异的单抗捕获，在细胞溶解后，捕获的细胞因子与第二种生物素化的检测性抗体结合 ...

IFN-γ（干扰素-γ）主要产生于激活的T细胞和NK细胞。TH1型响应的特点是通过辅助T细胞和细胞毒T细胞产生IFN-γ，所以高水平IFN-γ的产生是由于寄主应对细胞内的病原体产生了有效的防御。酶联免疫斑点法通常用于评估抗原特异的T细胞的功效，即检测IFN-γ的释放。酶联免疫斑点法是一种非常灵敏的免疫检测方法，它可以在单细胞水平检测细胞 ...

1. PBS 溶解抗原为 30 μ g/ml，加 100 μ l/孔于 PVDF 膜铺底的 96 孔灭菌板过夜； 2. 第二天吸去包被液后，加 5％FCS 的 PRMI 1640 培养基 100 μ l 封闭 1 小时，37℃； 3. 准备脾细胞悬液（用氯化铵去除红细胞，制备成单个脾淋巴细胞悬液） ； 4. 从 1 × 106/ 孔开始，按 1:3的稀释度开始逐孔稀 ...

ELISPOT技术的独特优点已经让它在抗原特异性T细胞免疫学研究上独占鳌头。它是当今唯一能够检测到到百万分之一阳性细胞率的检测技术。如此高的灵敏度就连流式细胞技术（细胞内细胞因子染色）和tetramer技术也望尘莫及（Letsch A et. al.， 2003）。此外由于淋巴细胞的冻存复苏问题也得到了完美的解决，经过冻存复苏的细胞并不丧失免疫功能（Maecker HT et. al.， 200 ...

ELISPOT全名为酶联免疫斑点检测，英文：Enzyme-linked Immunospot Assay。它结合了细胞培养技术与酶联免疫吸附技术（即ELISA技术），能够在单细胞水平检测细胞因子的分泌情况。其技术原理，一句话概括就是：用抗体捕获培养中的细胞分泌的细胞因子，并以酶联斑点显色的方式将其表现出来（Sedgwick JD 2005）。 该技术检测细胞因子具有三大优点：其一，灵敏度高。在一 ...

ELISPOT方法从创立至今已经有20多年的历史了。1983年，在地球南北两个半球地理位置相距遥远的两个研究小组几乎同时、独立的创立了这项技术。一个研究小组位于澳大利亚西部的柏斯Peth，牵头人是当时正在当地Margaret女王医院儿童医学研究所攻读博士学位的Jonathon D. Sedgwich （Sedgwick JD et. al. 1983）。另一个研究小组位于北欧瑞典城市哥德堡Got ...

ELIspot基本操作过程： 一、包被96孔板： 用70％乙醇浸润96孔板中的PVDF膜30s 加入捕获抗体（PBS稀释），4℃过夜 倒空板中包被液，轻轻在纸上拍干，用PBS洗涤，禁用洗板机 加入100ul 2%的脱脂奶粉（或者BSA）室温孵育2小时，封闭板中空白位点 PBS洗涤1次。 （如果暂时不用，可将96孔板干燥后4保存，可保存2周以上） 二、细胞刺激和细胞因子捕获 从新鲜血液中用Fico ...

摘　要: 目的　探讨ENA 多肽抗体谱与L E 细胞(L EC) 检查在SL E、ITP 及肾炎之间检测结果的关系。方法　对同一病人应用免疫印迹法检测ENA 多肽抗体谱以及用改良血块法检查L E 细胞共136 例(SL E 78 例、ITP 22 例、肾炎36 例)。结果 在52 例L EC 阴性SL E 患者中 ENA 多肽抗体谱总阳性率为80.0% (42/52) ; 在26 例L ...

端粒是真核生物染色体末端的特异DNA-蛋白结构，端粒DNA是一系列重复的富含G的DNA序列，这一序列在生物进化中有高度的保守性（人重复序列为TTAGGG）。已确认端粒在保护基因组DNA不被降解、防止染色体有害的结合（如染色体末端融合、重排、染色体移位和染色体缺失）中起重要作用。 由于DNA聚合酶不能复制线性DNA的最末端，多数正常体细胞的端粒末端每经一个复制循环就进行性缩短。这一现象在体内和体外都 ...

一、 ELISPOT技术概述 1. 技术原理和技术特点 ELISPOT全名为酶联免疫斑点检测，英文：Enzyme-linked Immunospot Assay。它结合了细胞培养技术与酶联免疫吸附技术（即ELISA技术），能够在单细胞水平检测细胞因子的分泌情况。其技术原理，一句话概括就是：用抗体捕获培养中的细胞分泌的细胞因子，并以酶联斑点显色的方式将其表现出来（Sedgwick JD 2005）。 ...

ELISPOT的历史可以追溯到1963年Jerne等人创立的溶血空斑技术(hemo-lytic plaque forming cell assay HPF)这项技术可用于检测并计数单个抗体形成细胞。随着单克隆抗体技术的成熟1983年Czerkinsky等采用此法检测脾细胞中分泌特异性抗体的细胞数发现该方法敏感性高简便易行。后来他们又用这种方法定量分析受到有丝分裂原刺激的外周血中分泌IFN2&gam ...

CTL 提供唯一由实验室开发并精制的 ELISPOT 系统。 目前已经发展到第三代，称为Seriese 3系列。 根据客户的不同分析需要以及预算， CTL 设计了两种类型的分析仪，包括 Analyzer 和 ImmunoScan 两种产品。两者成像方式有所区别，分析软件均一样。为了提高 ELISPOT 分析仪的处理容量，提高效率， CTL 还提供自动送板的机器人（ Robotic ）。 1.Imm ...

问：ELISPOT 分析中应该使用什么样子的吸头？ 答：吸取细胞中，推荐使用开口较大的管尖，以减少剪切力，防止T细胞的凋亡。请尽量不要将管尖碰到膜。 问：有时候在培养皿底部有条纹和不规则的斑点出现。这是什么原因导致的？ 答：在分析过程中，T细胞的移动活跃。特别的，在活体或者培养皿中，预先激活的 T 细胞的迁移很快，常常留下细胞因子的痕迹。同时，如果板被震动（例如孵箱门的开关的撞击）或者在捕获中被移 ...

ELISPOT板的主要生产商如：U-CyTech Millipore Nunc BD Whatman等。目前生产的ELISPOT板包括透明，不透明（白色），PVDF膜等多种类型的板。 国外主要生产商所生产的各类型ELISPOT板都能良好的进行ELISPOT试验。不推荐使用PVDF膜ELISPOT板。其原因有以下方面：1）PVDF膜在使用中容易因为温度、湿度、干燥、外力等原因产生局部皱褶，变形影响试 ...

透明板在操作的时候比PVDF板稍微容易点，PVDF板在使用时要进行预处理板，操作时还要小心不要把那层膜捅破了！！透明板就是显示的斑点都是黑色的，不能进行几种因子的同时测定，而PVDF板就可以用斑点颜色的变化一次来测定几种细胞因子总结：都有优缺点，个人认为，测一种细胞因子的话还是透明板比较好 ...

第一部分：关于ELISPOT 1． 什么是ELISPOT检测? 答:酶联免疫斑点 ( enzyme-linked immunosorbent spot ELISPOT) 检测技术是通过两种高亲和力的特异性抗细胞因子抗体来检测淋巴细胞分泌细胞因子情况的一种方法。 淋巴细胞在体内被抗原激活后，或者在体外培养中被培养液中含有的特异性抗原或刺激剂激活后，将这些细胞转入ELISPOT培养板中。这些活化的淋巴 ...

酶联免疫斑点（ELISPOT）技术是当今世界上检测生物体细胞免疫水平的最佳技术。它集高灵敏度、高可信度、高通量、单细胞水平、功能性检测与低成本等诸多优点于一身，在国内外免疫学界获得了广泛的应用，成为主流免疫学检测技术之一。我们来一一详述这些优点。 l 灵敏度高 理论上，ELISPOT高达百万分之一，也 ...

为了实现ELISPOT的标准化，显色最好在恒温箱内进行，温度控制在25°C±5°C，显色25分钟为宜。另外，在37°C显色也是不错的一个方法，但要注意相应的缩短显色时间到12-18分钟，并且显色中勤检查。为了提高ELISPOT检测结果的可重复性，增加实验的可信度，必须建立一套标准化的实验操作规范。标准化的实验操作规范不仅仅是一些实验操作，更是一个系统工程，需要 ...