污染及防治

养细胞是医学研究生的基本功。我养过骨髓 MSC、心肌细胞、心肌成纤维细胞、AD293 腺病毒包装细胞、PA317 逆转录病毒包装细胞。养得最多的是 MSC。有三个小经验和大家分享一下：1. 不要烧瓶口。大多数人都喜欢在酒精灯的火焰上关瓶子，觉得这样可以避免污染。不知道大家是不是有培养基怎么越用越发紫的困惑？知道为什么吗？烧瓶口烧的。培养基一般都是用碳酸 / 碳酸氢跟作缓冲体系。瓶口在火焰上的时候，炽热的空气进入瓶内。塞紧塞子放入冰箱后，空气变冷 ...

据统计约30%细胞系被交叉污染或错误辨识，因使用了交叉污染或错误辨识的细胞而导致研究结论错误、结果不可重复、临床细胞治疗灾难性后果……，这浪费大量时间、精力和金钱。Everything was going along fine until they discovered their HeLa cell line expressed Y chromosome markers因此近年NIH、ATCC、Nature和Science等对此多次发出呼吁，要求研究者对细胞进行鉴定 ...

细胞培养的过程中，经常见到黑色的颗粒或小黑点，这种情况是怎么引起的呢？该怎么避免呢？原因：黑点，大概有细胞本身带的，环境有的，还有人身上带进细胞间的， 还有就是血清和培养基。解决办法：1、如果小黑点有增殖趋势，那么就有可能是污染了，需要处理；2、如果小黑点没有增殖趋势，且不影响细胞生长，也不影响实验的话，则可能a、是「黑胶虫」，黑胶虫究竟是一种生物还是非生物，本身就存在争议。有人认为是从血清中来的一种原虫，也有人认为是细菌，或 ...

您还在为买不到高效能进口血清苦恼吗？请试用我们的全新血清替代物BSSubTM-XF 细胞培养添加剂BSSubTM-XF 细胞培养添加剂BSSubTM-XF 是细胞培养添加剂，能够很好的替代细胞培养基中的 FBS（胎牛血清），是专为各种哺乳动物细胞的体外培养而开发的。 BSSubTM-XF 已用于各种原代细胞和细胞系的培养。BSSubTM-XF 无异源动物成分，不含牛或其它动物来源蛋白。特色和优点性价比高，无异源/血清替代物细胞生长的天然营养 ...

细胞培养（特别是传代细胞）被支原体污染是个世界性问题，在细胞培养中支原体感染发生率达到63%,只要有一个具有增殖能力的支原体就能引起培养体系的污染,支原体则像慢性毒药一般，杀细胞于无形中，据统计，超过25%的细胞系中感染了支原体，研究者又不能通过可视法对其进行检测，而且它对细胞的生长率影响较小，也不易引起注意，所以研究者并不知晓。支原体污染发生后危害巨大，能改变细胞的DNA,RNA及蛋白表达，改变细胞、篡改数据，造成 ...

细胞培养中的无菌技术： 1. 实验进行前，无菌室及无菌操作台(laminar flow) 以紫外灯照射30-60 分钟灭菌，以70 % ethanol 擦拭无菌操作台面，并开启无菌操作台风扇运转10 分钟后，才开始实验操作。每次操作只处理一株细胞株，且即使培养基相同亦不共享培养基，以避免失误混淆或细胞间污染。实验完毕后，将实验物品带出工作台，以70 % ethanol 擦拭无菌操作台面。操作间隔 ...

1.实验目的： 通过细胞的体外培养来检测产品的生物性能是否达到要求。 2.实验原理： 体外培养的细胞株要在体外持续地培养就必须传代，以便获得稳定的细胞株或得到大量的同种细胞，并维持细胞种的延续。培养的细胞形成单层汇合以后，由于密度过大生存空间不足而引起营养枯竭，将培养的细胞分散，从容器中取出，以1:2或l:3以上的比率转移到另外的容器中进行培养，即为传代培养。通过贴壁细胞的传代培养，观察细胞的生 ...

一、实验室设计1、细胞培养是一种无菌操作技术，要求工作环境和条件必须保证无微生物污染和不受其它有害因素的影响。2、细胞培养室和设计原则是防止微生物污染和有害因素影响，要求工作环境清洁、空气清新，干燥和无烟尘。3、细胞培养室的设计原则一般是无菌操作区设在室内较少走动的内侧，常规操作和封闭培养于一室，为10万级洁净环境的洁净室。而洗刷消毒工作设在洁净室外，避免物品污染洁净室内环境。细胞洁净室需 ...

1、冷冻管应如何解冻？ 取出冷冻管后， 须立即放入37 ℃水槽中快速解冻， 轻摇冷冻管使其在1 分钟内全部融化， 并注意水面不可超过冷冻管盖沿， 否则易发生污染情形。另冷冻管由液氮桶中取出解冻时， 必须注意安全， 预防冷冻管之爆裂。2、细胞冷冻管解冻培养时， 是否应马上去除DMSO？除少数特别注明对DMSO 敏感之细胞外， 绝大部分细胞株（包括悬浮性细胞）， 在解冻之后， 应直接放入含有10-15 ...

支原体污染细胞后，培养液可不发生混浊。多数情况下细胞病理变化稍微或不显著，细微变化也可由于传代、换液而缓解，因此易被忽视。

体外培养的细胞受到严重污染时，有时即使想尽各种办法也难以挽回。因此，防止污染，预防是关键。只有将预防措施贯穿于整个细胞培养的始终，才能将发生污染的可能性降到最小程度。一般预防可从以下几方面着手。

本文提出了细胞培养液中不加抗生素的一些理由

本文介绍了在细胞培养过程中减少污染的方法

本文介绍了细胞培养中常见的污染

以表皮细胞为例，用皮肤表皮和真皮分离培养法可获得纯上皮细胞。

1.实验进行前，无菌室及无菌操作台（laminar flow）以紫外灯照射30-60分鐘灭菌，以70%ethanol擦拭无菌操作抬面，并开啟无菌操作台风扇运转10分鐘后，才开始实验操作。 2.每次操作只处理一株细胞株，且即使培养基相同亦不共用培养基，以避免失误混淆或细胞间污染。 3.无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞，必要物品，例如试管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暂时放置，其他实验用品用完即应移出， ...

丁香园网友doctorwyz： 你们好。在我发这份帖子的时候我还在犹豫，是否应该将我的经验如实地告诉给大家，因为所谓的黑胶虫污染十分普遍，难以消除，很多人谈黑色变，我究竟有怎样的方法消灭黑胶虫，我的观点和方法是否能得到大家的认可，无论怎样，我相信我的经验绝对值得大家借鉴，会对那些困扰于所谓的黑胶虫污染的战友们有所帮助。 首先，世界上根本就没有什么黑胶虫，没有人知道黑胶虫的英文名字是什么，没有哪个权 ...

细胞培养中常见的污染情况总结如下: 常见的污染如下： 1、细菌：细菌在普通倒置显微镜下为黑色细沙状，根据感染细菌的不同，可有不同的外形，培养液一般会浑浊变黄，对细胞生长影响明显。 仔细检查一下器皿的灭菌情况，是否在高压灭菌时放气时间足够，压力足够！尤其是和储存培养液接触的移液管等物品，连续两次污染的话有可能造成储存液污染，一定要注意！下次使用前检查一下培养液是否存在浑浊的现象！ 可在培养液中加相应 ...

丁香园网友simon的观点： 支原体是一种大小介于细菌和病毒之间(最小直径0．2um)并独立生活的微生物．约有1%可通过滤菌器。支原体无细胞壁形态呈高度多形性．可为圆形、丝状或梨形。 支原体形态多变，在光境下不易看清内部结构。电镜下观察支原体膜为三层结构．其中央有电干密度大的密集颗粒群或丝状的中心束。支原体多吸附或散在于细胞表面和细胞之间。横断面与细胞微绒毛相似，但微绒毛电子密度比支原体小，且中央 ...

丁香园网友ronghong_2000的观点： 我们实验室最近一次的情况: 我们前后从上海细胞中心买了三批细胞，细胞刚到的时候，观察均生长良好，密度适中，培养液清亮，也没有见小黑点，但是对细胞传代以后就陆续出现多少不等的小黑点，有时候在一夜之间暴长，给培养液加庆大霉素，也无济于事，对贴壁细胞用生理盐水及D-hanks液冲洗七遍后见减少，但是随后几天又出现，刚开始怀疑操作有问题，但是由有经验的老师操作 ...