冻存与复苏

一、程序冻存步骤（需梯度降温）1、配置冻存液，冻存液推荐配比：55%（基础培养基）+40%(血清)+5%（DMSO）或90%胎牛血清+10%DMSO；推荐使用Procell通用血清型程序冻存液，货号PB180436；2、制备好的细胞悬液计数，计算总细胞量；3、细胞离心后尽量吸干净上清，离心转速1200rpm（250g）3min；4、加入配置好的冻存液重悬，调整细胞浓度为3×106~1×107cells/mL；5、分装入冻存管，一个冻存管 ...

目前，细胞冻存最常用的技术是液氮冷冻保存法，主要采用加适量保护剂的缓慢冷冻法冻存细胞。细胞在不加任何保护剂的情况下直接冷冻，细胞内外的水分会很快形成冰晶，从而引起一系列不良反应。如细胞脱水使局部电解质浓度增高，pH 值改变，部分蛋白质由于上述原因而变性，引起细胞内部空间结构紊乱，溶酶体膜由此遭到损伤而释放出溶酶体酶，使细胞内结构成分造成破坏，线粒体肿胀，功能丢失，并造成能量代谢障碍。胞膜上的类脂蛋白复合体也易破坏引 ...

科幻电影中将冻存若干年的生命体重新解冻复活的情节在生命科学研究过程中每一天都在上演。为了将每一种有生命的细胞较好的保存其原有的细胞特性或者长久的保存种质资源，实验人员往往将细胞用特殊配置的细胞冻存液保存于-196℃ 的液氮，使得细胞暂时脱离生长状态，等到实验需要的时候再从液氮中取出复苏应用。在这一看似神奇的生命存储过程中，我们不禁要问，这是如何实现的呢？其实，细胞冻存和复苏的教科书和实验手册上面都有。小编不想再重 ...

一、细胞冷冻保存1.材料生长良好之培养细胞、新鲜培养基、DMSO(SigmaD-2650)、无菌塑料冷冻保存管(Nalgene　5000-0020)、0.4％（w/v）trypanblue(GibcoBRL15250-061)、血球计数盘与盖玻片、等速降温机(KRYO10SeriesII)2、冷冻保存方法（1）传统方法:冷存管置于4℃10分钟----20℃30分钟----80℃16～18小时(或隔夜)---液氮槽vaporphase长期储存。-20 ...

在园子里经常看到询问冻存、复苏细胞的方法和注意事项。我新开此贴，专门介绍一些致命的“败笔”，和解决方法。希望对大家有帮助。（以Raji为例） 细胞冻存： 1. 错误的时机：细胞状态不好（长的太过了，培养液已经很黄；细胞可疑污染；细胞已 经开始凋亡或崩解；连续培养超过二个月，细胞性状已有改变改变）。 解决： 最佳时机：细胞增殖旺盛，情况稳定，试验效果良好， ...

冻存细胞的复苏 非玻璃化冻存的复苏方法 主要材料 1. 仪器设备：恒温水浴箱、高速离心机； 2. 培养用液：完全培养液。 复苏过程 1. 调配370C～400C的温水，或将恒温水浴箱的温度调节至370C～400C； 2. 从液氮中取出冻存管，立即投入370C～400C 温水中迅速晃动，直至冻存液完全溶解； 3. 将细胞 ...

一、细胞复苏和接种 1. 37℃预热大鼠间充质干细胞培养液（RM-001）和基础培养液（RM-001B）。 2. 从液氮中取出细胞产品管，快速将其置入37℃水浴中解冻，直到管中只剩下最后一片结晶（注意：不要让水没过产品管）。 3. 在生物安全柜中，用75%的酒精擦拭产品管外壁。 4. 将产品管中的细胞移至15 ml无菌离心管中，慢慢逐滴加入预温的37℃ 基础培养液（RM-001B）4-5ml混匀 ...

视频介绍的斑马鱼精子超低温保存方法由Harvey法改编而来，在原始方法的基础上引入了两处改变。首先，使用不含冷冻保护剂的冷冻介质标准化精子体积；第二，精子冷藏于冷冻管中，不再存储于毛细管，既简化了程序，又提高样品的均匀性。

目前卵母细胞和胚胎的冷冻保存方法主要有两种：慢速冷冻和玻璃化冷冻。尽管玻璃化冷冻速度快且无需昂贵的实验设备，慢速冷冻仍是卵母细胞/胚胎冷冻保存最常用的方法。在这个视频，我们逐步讲述了如何高存活率地收集和慢速冷冻仓鼠卵母细胞。同样的程序也适用于冷冻和解冻处于不同发展阶段的小鼠胚胎。

将演示正确的人类胚胎干细胞冷冻和解冻过程，包括快速解冻保存于液氮灌中的人类胚胎干细胞，接种至含小鼠胚胎饲养细胞的平板，缓慢冷冻人类胚胎干细胞。

1、取出细胞，迅速放入37℃温水中快速解冻。2、吸出细胞悬液，并加10倍以上培养液。3、1000r/分钟离心5分钟，去除上清。4、用培养液适当稀释后接种培养瓶，放入37℃ CO2培养箱静置培养。 镜检细胞贴壁能力。次日更换一次培养液，继续培养。 ...

1、选用生长情况好，数量较多的原代细胞，冻存前一天换液一次。2、贴壁细胞需用0.25％胰酶常规消化将细胞消化下来，将细胞悬液收集至离心管中。3、1000rpm离心5分钟，弃上清液。4、沉淀加含DMSO的培养液，计数，调整至（1-10）×106/ml。5、将悬液分至冻存管中，每管1 ml。6、密封冻存管，封口一定要严，否则复苏时易出现爆裂。7、用记号笔标明细胞种类，冻存日期。8、按下列顺序降温：室温 ...

原代细胞复苏的基本操作方法

哥伦比亚大学医学中心5月25日宣布牙齿再生技术获得新突破，研究人员成功在动物口腔内进行了牙齿再生实验，这意味着未来人们就可将该技术应用于临床实验领域。

收到细胞株包裹时，请检查细胞株冷冻管是否有解冻情形，若有请立即通知。细胞株请尽速开始培养， 或立即冷冻保存（置于-70 ℃， 隔夜后， 移到液氮）。

细胞冻存和复苏

做实验前要先学会冻存，以备自己在后面的实验中能保持同一来源、稳定可靠的细胞，且可减少污染或其它不利影响。

1、欲冷冻保存之细胞应在生长良好(log phase) 且存活率高之状态，约为80 – 90 ％致密度。 2、冷冻前检测细胞是否仍保有其特有性质，例如hybridoma 应在冷冻保存前一至二日测试是否有抗体之产生。 3、注意冷冻保护剂之品质。DMSO 应为试剂级等级，无菌且无色(以0.22 micron FGLP Telflon 过滤或是直接购买无菌产品，如Sigma D-2650 ...

概述 Spallanzani（1776）最早发表了冷“处理”对“细胞”生命活动影响的报道，他用雪冷冻玻璃瓶中的马精子10多分钟之后，再将玻璃瓶放回室温下，发现了一个令人惊奇的现象，那些原本已经不动了的精子又“复活”了，就好象是刚从输精管排出来的一样，冷处理延长至数十分钟，情况依然如此。于是，他认为冷不能杀死精子。大约100年 ...

问：以前拿回细胞后，传代、冻存后复苏过几次都没什么问题，最近因实验室孵箱污染，清洁消毒细胞室后，重新复苏，结果连续复苏6支，细胞均未贴壁，今晚复苏6小时后观察有一瓶相对贴壁细胞数较之前复苏失败瓶多，但贴壁细胞状态不好，形态不佳，透光度亦不好！急求各位大侠会诊指导！ 答：juventus2004认为复苏过程没有问题的，是否是从液氮拿出直接放入温水？培养箱问题，二氧化碳浓度？培养基问题？PH值？要么加 ...