原代培养

足细胞来源： 丁香园网友yulinlong的观点为： 很多细胞中心就有卖的，或者有的公司可以代理ATCC公司的就可以。 有的文献用的永生化细胞系是他们自己建的系或者别人建系赠予的，你也可以考虑向国内或者国外去请求馈赠。有的会给的。 丁香园网友wenyueqiang的观点为： 美国爱因斯坦大学的PETER MUNDEL有 足细胞培养方法： 大鼠原代足细胞： 丁香园网友gaoxueyan99的观点为： ...

一、 细胞培养实验室的设置及设备 （一）细胞培养实验室的设置 组织细胞培养技术与其他一般实验室工作的主要区别在于要求保持无菌操作，避免微生物及其他有害因素的影响。目前，超净工作台的广泛使用，很大程度上方便了组织细胞培养工作，并使一些常规实验室有可能用于进行细胞培养。 细胞培养实验室应能进行六方面的工作：无菌操作、孵育、制备、清洗、消毒灭菌处理、储藏。 1．无菌操作区 （1）无菌操作室：无菌操作区只 ...

1、认真按照操作规程进行实验，一般不大会导致污染，很多情况下是由于所用的试剂或培养基有污染而使实验失败， 2、粉末培养基配制好后 ( 加了血清 ) ，一般在 4 度尽量不要超过 1 个月，如在 -20 度 存放时间 可长一些，但最好也不要超过 3-4 个月，可能对于永生化细胞株来说要求不是太高，但我在过去的 4 年里一直是作原代细胞培养的，细胞娇弱，经验表明放置时间不宜过长。 3、关于实验用品 ...

1、保存血清最好的方法? 建议血清应保存在-5℃至-2O℃。然而，若存放于4℃时，请勿超过一个月。若您一次无法用完一瓶，建议您无菌分装血清至恰当的灭菌容器内，再放回冷冻。 2、如何解冻血清才不会使产品质量受损? 建议您将血清从冷冻箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室温下使之全融。但必须注意的是，融解过程中必须规则地摇晃均匀。 3、血清解冻后发现有絮状沉淀物出现，该如何处理? 血清中沉淀物 ...

体内组织细胞在体外培养时，所需培养环境基本相似，但由于物种、个体遗传背景及所处发育阶段等的不同，各自要求条件有一定差别，所采取的培养技术措施亦不尽相同，现介绍个别组织细胞培养的要点如下: 上皮细胞培养 上皮细胞包括腺上皮是很多器官如肝、胰、乳腺等的功能成分，又由于癌起源于上皮组织，故上皮细胞培养特别受到重视。但上皮细胞培养中常混杂有成纤维细胞，培养时生长速度往往超过上皮细胞，并难以纯化，同时上皮 ...

组织培养肿瘤细胞生物学特性 肿瘤细胞与体内正常细胞相比，不论在体内或在体外，在形态、生长增值、遗传性状等方面都有显著的不同。生长在体内的肿瘤细胞和在体外培养的肿瘤细胞，其差异较小，但也并非完全相同。培养中的肿瘤细胞具以下突出特点： （－）形态和性状 培养中癌细胞无光学显微镜下特异形态，大多数肿瘤细胞镜下观察比二倍体细胞清晰，核膜、核仁轮廓明显，核糖体颗粒丰富。电镜观察癌细胞表面的微绒毛多而细密，微 ...

无菌操作基本技术 1、实验进行前，无菌室及无菌操作台(laminar flow) 以紫外灯照射30-60 分钟灭菌，以70 % ethanol 擦拭无菌操作抬面，并开启无菌操作台风扇运转10 分钟后，才开始实验操作。每次操作只处理一株细胞株，且即使培养基相同亦不共享培养基，以避免失误混淆或细胞间污染。实验完毕后，将实验物品带出工作台，以70 % ethanol 擦拭无菌操作抬面。操作间隔应让无菌 ...

贴壁法原代培养 1.1　细胞培养 1.1.1　培养液配制　DMEM（美国Gibco公司），Hepes（15mmol/L），青霉素（100u/ml），链霉素 （100mg/ml），优质胎牛血清（原代培养浓度20%，传代培养浓度10%，美国Hyclone）。 1.1.2　培养器皿　25cm2塑料培养瓶（Costar），培养面积25cm2；直径3.5cm培养皿。 1.1.3　大鼠血管平滑肌细胞培养　动物 ...

单核细胞的分离 基本原理：本文分离单核细胞所用方法是Percoll非连续性密度梯度离心法，主要是根据不同细胞间密度的差别进行细胞分离。此法易操作，且使用通常的实验设备即可完成。 试剂与器材 ·外周血单个核细胞（参见实验1） ·PBS1×和PBS10×（无Ca2+、Mg2+），含0.5mM EDTA ·胎牛血清（56℃，30分钟加热灭 ...

常用设备 准备室的设备： 单蒸馏水蒸馏器、双蒸馏水蒸馏器、酸缸、烤箱、高压锅、储品柜（放置未消毒物品）、储品规（放置消毒过的物品）、包装台。配液室的设备：扭力天平和电子天平（称量药品）、 PH 计（测量培养用液 PH 值）、磁力搅拌器（配置溶液室搅拌溶液）。 培养室的设备： 液氮罐、储品柜（存放杂物）、日光灯和紫外灯、空气净化器系统、低温冰箱（ -80℃ ）、空调、二氧化碳缸瓶、边台（书写实验 ...

第一节 培养细胞学 cultural cytology 何谓是培养细胞学？ 指细胞在体外培养的特定条件下，通过对离体细胞的研究，获取的研究结果与细胞生物学具有三个学科相似的信息。 细胞生理学： 研究细胞生命活动规律，如何从环境中摄取营养，经过代谢获得能量，以促进生长、分裂及其表达功能的。 分子细胞学： 从遗传信息 (DNA—RNA—蛋白) 角度研究胞内遗传物质的结构和表达的 ...

细胞分离技术 一、离心技术 离心是研究如细胞核、线粒体、高尔基体、溶酶体和微体，以及各种大分子基本手段。一般认为，转速为10~25Kr/min的离心机称为高速离心机；转速超过25Kr/min，离心力大于89Kｇ者称为超速离心机。目前超速离心机的最高转速可达100Kr/min，离心力超过500Kg。 （一）、差速离心（differential centrifugation） 在密度均一的介质中 ...

丁香园网友jiangql的观点为： 1、尽量用早期的细胞，传代太多状态不好，产毒也不好，贴壁困难。 2、塑料的瓶子，DMEM+10%的小牛血清即可，要求并不高，ATCC上有详细的培养方法。 3、主要是传代，胰酶消化点到即止，不能和其它成纤维细胞一样。 最近的体会是：不用胰酶，轻轻吹打使细胞脱壁，然后将滴管前端插一个200ul的枪头，再吹打1min左右（有点费力），肉眼看不见大的细胞团即可，此时显微 ...

丁香园网友zlawrance的观点为： （1）细胞冻存管一般有1.5-2ml左右体积，原则上可以存放1.5ml充满均匀悬浮细胞的冻存液，一些人喜欢灌注1-1.5ml冻存液冻存，这实际上并不好。原因如下：冻存液冻存需要一段时间，如果这段时间冻存管倾斜，液体容易流到管口，很容易在后续的操作中造成污染。建议0.5-1ml之间即可。 （2）许多教科书推荐细胞解冻用37度水，本人发现温度可以适当提高，39度 ...

本文分离单核细胞所用方法是Percoll非连续性密度梯度离心法，主要是根据不同细胞间密度的差别进行细胞分离。此法易操作，且使用通常的实验设备即可完成。

第一，盖玻片需要过酸，并且自来水、蒸馏水冲洗干净。两张或者以上的玻片很容易因为虹吸作用粘到一起，很容易冲不干净，很容易把两张完全重叠在一起的玻片当成一张，一定要看清楚，晾干片子最好是在消毒饭盒中进行，饭盒底面放上纱布，将玻片斜靠在饭盒侧壁，玻片正面不要接触纱布，否则会粘上毛毛的。然后高压蒸汽灭菌，烤箱中烤干。 第二，爬片前最好用多聚赖氨酸或者层粘蛋白或者胶原溶液处理玻片，未处理过的细胞不容易贴壁， ...

大部分文献报导差速时间是2小时，但我个人做实验是遇到的情况说明2小时有些长了，已经有心肌细胞贴壁，而且把上层悬液吸出后转移，不知道为什么不好帖壁，成活率较低。我用的是0.125%胰酶分次消化。请各位有经验的战友讨论。 我觉得影响心肌细胞贴壁的因素可以总结为如下几点： 1、所用老鼠的品系以及年龄：SD大鼠和Wister大鼠还是有很大差别的，包括小鼠在内也是，大部分用SD大鼠差速贴壁时间为2小时，个 ...

养BMDC有好几个月了，看了2、3篇文献就开搞，发现论坛里还是有一些战友养这个。就想开个专题讨论贴，请新手老手都上来谈谈经验或者问些问题。集思广益，大家相互促进下。 我在论坛里看到因为有战友养DC看百把篇文献的，感到佩服又奇怪，就BMDC的培养我目前只知道有个经典版本和改良版本。 我用的是改良版本，参考文献改天附上（可能养这个的战友大多看过了），说 1.取小鼠股骨胫骨，小鼠要年轻！（6W-8W，以 ...

人血细胞由红细胞,白细胞,血小板等组成.实验中常用白细胞来做研究,如炎症渗出,细胞迁移,识别等都涉及到白细胞.白细胞又分为:粒细胞,淋巴细胞,单核细胞等.它们具有不同的功能.实验中常需要分离血细胞方能进行。 本贴主要论述人外周白细胞的分离，主要是中性粒细胞（Neutrophil），淋巴细胞（Lymphocyte），单核细胞（Monocyte）的分离。其它骨髓，脾淋巴细胞等分离可参，不同种属间请注意分离液的选择。

1. 乙醚麻醉致死大鼠（3～5 weeks）/小鼠（1～2月，年龄稍大可保证细胞数量）注：1、建议用大鼠做，小鼠取样时，细胞数量偏少，较难养活。2、对于大鼠的年龄，好像要求不太严格，文献上记载一般用3～5 weeks，但我用12 weeks的大鼠做也能成功。 2. 75%乙醇中消毒5～15min。 3. 无菌条件下取腹股沟部、肾、附睾周围的脂肪组织，用Hanks（Hanks配置较麻烦，用PBS也无 ...