基因转染

Procedure for Transfection of Mammalian CellsMaterials:LipofectamineIMDM containing 10% fetal bovine serum, 1% glutamine, 1% aaIMDM containing 1% glutamineIMDM containing 20% fetal bovine serum, 1% glutamine, 1% aa(1)In a six-well or 35 mm tissue culture plate, seed ~2x 105 cells per well ...

影响了版面正常操作表示报欠，现将文章部分列在如下：A hypothermic-temperature-sensitive gene silencing by the mammalian RNAiTakashi Kameda, Kenji Ikegami, Yang Liu, Kunihiko Terada, and Toshihiro SugiyamundefinedDepartment of Biochemistry, Akita University School of Medicine 1-1-1 Hondo, Akita 0 ...

以FAK为靶点的RNA干扰的黑色素瘤基因治疗RNA 干扰（RNA interference, RNAi）是由双链RNA 介导的序列特异性的转录后基因沉默现象。它通过识别与之序列相同的mRNA 来使特定基因在转录后水平被降解。RNAi 技术具有高的基因沉默效率和特异性, 为基因治疗等研究领域提供了一个新的研究手段。黏着斑激酶（FAK）是一种定位于黏着斑的非受体型酪氨酸激酶，参与调控细胞的运动和增殖等生命功能。FAK 在肿瘤的生成和恶化过程中 ...

2008年初,由上海交通大学第一人民医院黄倩教授和美国科罗拉多大学李川源教授合作,携手北京病毒基因工程重点实验室吴小兵博士研究小组共同完成了目前国际上常用的病毒载体,象腺病毒\腺相关病毒\慢病毒(rAAV2/1, rAAV2, Ad5, Ad5/F35, Lentivirus)等病毒载体在视网膜上的特异性基因转导效率的研究,从而为特殊的视网膜疾病选用特殊的病毒载体进行基因治疗,提供了重要的见地认识!她们的结果发表在Current E ...

各位师兄师姐，本人在实验当中碰到一问题，不知道如何让解释好，想请教一下。实验设计向一肿瘤细胞株中转入一外源基因，采用瞬时转染的方法，流式检测对细胞周期的影响，结果如下：转染48hG0/G1（%）S（%）G2/M（%）未转染组62.1630.117.72空载体组52.3828.7818.84目的基因组54.1520.8525.00G0/G1（%）S（%）G2/M（%）未转染组65.8529.424.73空载体组53.4034.4012.21目 ...

收到你的邮件，得知你做转染遇到一些麻烦，看看这个有帮助吗？1。转染方法：有大量的技术和试剂用于将大分子转导至真核细胞中。这些大分子与胞内的组分反应，从而导致基因表达、蛋白质合成、细胞分化的诱导或抑制、细胞形态的改变、细胞的无限增殖或恶性转化。针对不同转染实验的各种目的和要求，没有任何一种方法或试剂对于所有的大分子转导都是最佳的。既然可以象转导蛋白质和小分子一样将DNA，RNA和寡聚核苷酸转导到各种细胞中，本手册将 ...

不知道那些大侠做过,可以一起讨论一下.我试了几种转染试剂 ( JetpET, Lipofectine), 转染效率都极低 .只有电转的时候,转染效率也至多达到5%.不知道怎么拿这个细胞做luciferase.筛选浓度我已经用到1mg/ml了,不知道大家都用的多少?常规用FUGEGE6效果好点, 想效率高用逆转录病毒!"筛选浓度"你指什么? G418 我用过1200ug/ml, 1500ug/ml.对，就是指的G418.大侠你用过Fugene6吗?转染效率有 ...

首先要确定是要做瞬时转染还是稳定转染？若为瞬时转染，就是一次性转染完毕后检测分析目标的基因表达或者蛋白．若为稳定转染，应先判断是用质粒进行转染还是用慢病毒进行转染。如果选择质粒，就得根据你用的质粒选择筛选药物，做药物筛选浓度就得两个礼拜左右（在做转染之前应先确定最佳筛选浓度）。转染后，将转染的细胞进行药物筛选，挑选出单克隆细胞群．再分个在９６孔板，然后继续扩增培养．.下面为有关脂质体2000转染的资料：LIPOF ...

转录因子作为一种调控基因表达的关键蛋白，在很多研究中都是需要重点监测的对象。特别是对具有活性的转录因子的检测，有着重要的意义。转录因子的一个重要特点是在经过翻译后修饰及其它一些变化以后才具有发挥功能的活性。传统的测方法，如ELISA、Western Blot、荧光定量PCR等，都不能区分活化与未活化的转录因子，限制了这些方法在转录因子检测方面的应用。目前比较常用的是基于转录因子与特定DNA序列结合原理的凝胶迁移 ...

腺相关病毒（Adreno-Associated Virus, AAV）是微小病毒科（Parvoviridae）家族的成员之一。这一家族成员是一类微小、无被膜及具有二十面体结构的病毒。病毒颗粒的直径在20～26nm之间，含有大小在4.7~6kb之间的线状单链DNA基因组。它的复制和增殖依赖于辅助病毒的存在。

病毒载体在生物医学的基础研究和产品开发中具有重要作用，细胞转染是制备病毒载体的关键步骤。然而现有转染试剂价格昂贵、操作繁琐，已成为快速、高效和大规模制备病毒载体的限制因素。QuickShuttle系列转染试剂是由北京康碧泉生物科技有限公司研发的一类具有自主知识产权、独特配方的阳离子型转染试剂，具有高效、低毒和易于使用等优点。QuickShuttle区别于常规转染试剂的两个最主要特点是：（1）可以在细胞传代后尚 ...

细胞转染与实验的设计原则磷酸钙-DNA共沉淀法核酸以磷酸钙-DNA共沉淀物的形式出现时，可使DNA附在细胞表面，利于细胞吞入摄取，或通过细胞膜脂相收缩时裂开的空隙进入细胞内，进入细胞的DNA仅有1%～5%可以进入细胞核中，其中仅有不到1%的DNA可以与细胞DNA整合，在细胞中进行稳定表达，基因转导的频率大约为10-4，这项技术能用于任何DNA导入哺乳类动物进行暂时性表达或长期转化的研究。此方法对于贴壁细胞转染是最 ...

基因转染是将具生物功能的核酸（RNA或DNA）转移或运送到细胞内，并使核酸在细胞内维持其生物功能的核酸转移技术。转染技术的目的是主要是研究真核基因的表达和调控，目前的方法包括磷酸钙共沉淀法，电穿孔法以及同DEAE-dextran或阳离子脂质体试剂形成复合物法。 在这些不同的方法中，DNA转导的效率，转导的机制，可重复性及使用的方便性都存在差异。而且，有效的DNA转导会伴随某些毒性或细胞抑制，其 ...

组织培养试剂 一般提示：优化您的细胞生长条件。只使用新鲜配制的培养基和添加剂，并经可能减少所用试剂的变更。 基础培养基—目前所使用的各种市售培养基（如，RPMI 1640和DMEM）。培养基的成分包括营养物质（氨基酸，葡萄糖），维生素，无机盐，和缓冲物质。有些成分非常不稳定，因此如果不在使用时新鲜加入就可能会产生问题。务必要使培养基避光保存。因为已知有一些组分和缓冲物质 ...

1. 在6孔板中接种1~3×105细胞/孔，加入2ml完全培养基，置CO2孵箱中37℃培养过夜。 2. 待细胞长到50-80%单层时，在无菌离心管中配制如下溶液： i. 溶液A：将4?g待转染的超纯DNA稀释到250?l无血清培养基中，静置5min ii. 溶液B：将2-25?l LipofectAMINE ...