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        真核细胞的转染实验步骤

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        1. 在6孔板中接种1~3×105细胞/孔,加入2ml完全培养基,置CO2孵箱中37℃培养过夜。

        2. 待细胞长到50-80%单层时,在无菌离心管中配制如下溶液:

        i. 溶液A:将4?g待转染的超纯DNA稀释到250?l无血清培养基中,静置5min

        ii. 溶液B:将2-25?l LipofectAMINE 稀释到250?l无血清培养基中,静置5min

        3. 混合溶液A和B,轻轻混匀,室温放置15-45min。

        4. 用2ml无血清培养基轻轻洗涤细胞,加入0.8ml无血清培养基/孔,将脂质体复合物滴加到孔中,轻轻摇晃混匀,置CO2孵箱中37℃孵育2-24hr。

        5. 用完全培养基替换转染液,继续培养。

        6. 24-72hr后检测蛋白质的表达或传代并加入选择性抗生素以筛选稳定表达株。

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