2.1 基因文库基因文库:是某种特定的生物所含有的能够包含所有基因的足够数目的克隆的集合。基因文库是通过纯化细胞总DNA,然后利用特定的限制性酶酶切产生能插入载体的片段,一般是λ替换载体、粘粒或者是YAC。图5-21 基因文库的构建过程 对于植物、动物,所需要的克隆数很大,鉴定目的基因是一项艰巨的任务。对于这些生物体,可以使用细胞特异的cDNA文库。cDNA文库是将mRNA反转录成cDNA, ...
标记育种是利用与目标性状基因紧密连锁的遗传标记,对目标性状进行跟踪选择的一项育种技术。与育种有关的遗传标记主要有四种类型: 形态标记(morphological marker)、细胞标记(cytological markers)、生化标记(Biochemical marker)和分子标记(molecular marker)。早在1923年,Sax等就提出利用微效基因与主基因的紧密连锁,对微效基因进 ...
克隆基因的方法有很多,根据研究基础的不同,可以使用以下的方法克隆目的基因: 1. PCR或RT-PCR法2. 从基因文库中分离基因3. 从cDNA文库中分离基因4. 转座子标签法5. 图位克隆法6. 差减杂交法、扣除杂交、差异显示法7. 人工合成法本章中主要介绍从基因文库中筛选目的基因的几种方法。获的目的克隆的方法有两种1) 目的基因的直接选择2) 从基因文库中筛选称为鸟枪射击法,建立一个包含所有 ...
Construction and Characterization of Adenovirus VectorsP. Joel Ross and Robin J. Parks Adapted from Gene Transfer: Delivery and Expression of DNA and RNA (eds. Friedmann and Rossi). CSHL Press Cold Sp ...
第二章 酵母双杂交筛选 1. 操作流程 诱饵基因转化筛库宿主菌Y190――含诱饵基因的Y190 保种――诱饵基因的 自激活检测――筛库(组织库或者小文库)――挑选鉴定阳性克隆――抽提阳 性克隆中PREY 质粒并在细菌中扩增――猎物(Prey)质粒与诱饵(Bait)质粒共 同转化Y190,验证其相互作用 2. 方 法 2. 1 诱饵基因转化筛库宿主菌Y190 1) 3 个1mm 克隆接种于3mlYP ...
第一章 基因克隆 1. 操作流程 收集基因信息——设计引物——PCR ——回收目的片段——与载体 连接,取得连接产物 —— 用感受态细胞做转化 ——接菌——阳性克隆鉴 定(酶切法或PCR)——质粒抽提——质粒测序——测序结果分析——克隆 信息输入数据库——质粒实物保存 2. 方法 2.1 设计引物 引物设计要求:引物长度为25bp-35bp.forward primer 和reverse prim ...
一、原理SNP (Single Nucleotide Polymorphism)即单核苷酸多态性,是由于单个核苷酸改变而导致的核酸序列多态性(Polymorphism)。据估计,在人类基因组中,大约每千个碱基中有一个SNP,无论是比较于限制性片段长度多态性(RFLP)分析还是微卫星标记(STR),都要广泛得多。SNP是我们考察遗传变异的最小单位据估计,人类的所有群体中大约存在一千万个SNP位点。一 ...
一、简介:SSR简单序列重复标记(Simple sequence repeat 简称SSR标记),也叫微卫星序列重复,是由一类由几个核苷酸(1-5个)为重复单位组成的长达几十个核苷酸的重复序列,长度较短,广泛分布在染色体上。由于重复单位的次数的不同或重复程度的不完全相同,造成了SSR长度的高度变异性,由此而产生SSR标记或SSLP标记。虽然SSR在基因组上的位置不尽相同,但是其两端序列多是保守的单 ...
1.6 TAlL-PCR 很早就有用随机引物的PCR,但由于无法有效地控制由随机引物引发的非特异产物的产生,所以一直未能广泛应用。近年来由IJiu等设计的TAIL-PCR(Termal Asymmetric Interlaced PCR)又叫热不对称交错PCR,则解决了这个问题,后来有研究表明,经改良过的TAIL-PCR成功地从突变体中克隆到外源插入基因的旁侧序列,从而为启动子的克隆提供了有效 ...
Introduction:One microarray set consists of 7 nylon membranes with 2.5 x 7.5 cm dimension. 2304 genes were spotted onto nylon membranes (Schleicher and Schuell GmbH Dassel Germany) using a GMS417 Micr ...
基因工程:将不同的生命元件按照类似于工程学的方法组装在一起,生产出人们所期待的生命物质。内含子,外显子:一个基因往往由几个互不相邻的段落组成,它的内部还包含一段或几段最终不相应出现在成熟mRNA中的片段,称为内含子。而相应出现在成熟mRNA中的片段则称为外显子。基因:是一个含有特定遗传信息的核苷酸序列,它是遗传物质的最小功能单位。蛋白质的一级结构:多肽链的氨基酸顺序。蛋白质的二级结构:多肽链中有规 ...
专题一:RNA干扰技术(RNAi)1995年,康奈尔大学的Su Guo博士用反义RNA阻断线虫基因表达的试验中发现,反义和正义RNA都阻断了基因的表达,他们对这个结果百思不得其解。直到1998年, Andrew Fire的研究证明,在正义RNA也阻断了基因表达的试验中,真正起作用的是双链RNA。这些双链RNA是体外转录正义RNA时生成的。这种双链RNA对基因表达的阻断作用被称为RNA干预(RNA ...
基因疗法是指将正常基因植入靶细胞代替病人细胞中的遗传缺陷基因,或关闭、抑制异常表达的基因,以达到预防和医疗疾病目的的一种临床医疗技术。在治疗遗传性疾病、恶性肿瘤、癌症、艾滋病病毒(HIV)、关节炎、糖尿病、腺苷脱氢酶(ADA)缺陷症、神经系统紊乱、心脏病等疾病方面,基因疗法发挥着越来越重要的作用。基因治疗中最重要的一个环节是选择适当的基因载体(Vector)。基因治疗载体一般分为病毒性载体和非病毒 ...
基因突变是指由于DNA碱基对的置换、增添或缺失而引起的基因结构的变化,亦称点突变。它的分类方式包括1)根据基因结构的改变方式,基因突变可分为碱基置换突变和移码突变两种类型;2)根据遗传信息的改变方式,基因突变又可以分为同义突变、错义突变和无义突变三种类型。基因突变的检测方法:从基因突变的性质来看,检测方法分为显性突变法、隐性突变法和回复突变法三类。广义的突变?检测可以从两个层次来入手:一个是蛋白质 ...
1 如果是染色体畸变,你可以用正常细胞的染色体与药物处理过的细胞的染色体对照进行检查,大致确定好事那个染色体后用FISH技术来检测染色体2 如果是基因发生了点突变,首先要明确是那个基因会有发生突变的趋势,采用SSCP(单链构象多态性)确定是否发生有突变,然后用测序法验证3 如果已知该药物所导致的突变,就可以采用测序,单碱基延伸法等方法进行检测 ...
一、核酸的纯化 在分子克隆的所有操作中,最基本的操作是核酸的纯化。其关键步骤是去蛋白质,通常只要用酚/氯仿。氯仿抽提核酸的溶液即可。每当需要把克隆有某一些所用的酶灭活或去除以便进行下一步时,可进行这种抽提。然而,如要从细胞裂解液等复杂的分子混合物中纯化核酸,则要先用某些蛋白水解酶消化大部分蛋白质后,再用有机溶剂抽提。这些广谱的蛋白酶包括链霉蛋白酶及蛋白酶K等,它们对多种天然蛋白均有活性,(1)用 ...
该技术在应用的过程中,肯定需要在实验条件上不断进行改进,而这种改进的好坏自然而然需要实验结果的验证。。V. Grüntzig在2002年做了该工作的一部分,结果认为,在限制性酶切时,很有必要去除其中影响DNA的酶切过程,并且实验证明了具体的酶切时间。具有说服力的结果如下: 1,T-RFLP出数据的速度快,不过只是具有半定量性;2,DNA片断的分离有两种常用的方法:1。1 凝胶电泳,近来使用的比较 ...
DNA抽提(主要内容如下)・ Working with DNA ・ DNA Extraction from Bacteria and Other Organisms ・ DNA Extraction from Cell and Tissue ・ Mitochondria DNA Isolation ・ DNA Extraction from Plants Fly Fungal ...
DNA的酶学操作DNA Modifying Enzymes (Michael Blaber)Introduction to bacterial restriction/modification system. It provides very useful background knowledge about restriction digestion DNA Modifying Enzym ...
DNA转化Chemical Transformation・ Transformation of Competent Cells (RbCl2 Method) (Goldberg Lab)Very nice protocol for E. Coli transformation including competent cell preparation and recipes・ ...