DNA制备

lilyfisher 红色的是复制出的DNA，那么在后随链中的复制是不连续的，如“最后一个冈崎片段”所示，我想请教一下，是不是书上写错了，应该是5/呢，谢谢。slytjiaofei 书没有错，随从链最后复制完的是3’端，对于新合成的子链而言最后合成出的是5’端。lilyfisher 非常感谢您的帮助。本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiong ...

cindy18180 各位好，小女子第一次做细胞转染，有许多问题想请教，请大家多多指导:)首先，我要获得我的目的基因,在genebank上面查到mRNA全长3526bp，cds：713-2767我想问是不是我要的目的基因的有效片段是2054bp，适合用什么方法获得呢？用RT-PCR会不会太长了，扩不出来，或者效果不好？急用，请教各位前辈zjubell 你应该是想做过表达吧，那你的质粒上应该有启动子的吧，比如CMV。那你只需要 ...

huahualian7 急急急问：DNA复制时连接冈崎片断的酶是聚合酶还是连接酶？谢谢啊！zhujoker 聚合酶yuxiongying DNA聚合酶1填补冈崎片段引物切除后的空隙，然后连接酶连接两个相邻的冈崎片段本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

yaopeng205 DNA复制时RNA引物是怎么切除的，切除之后又是那个酶作用，将引物部分补上的iscience Discontinuous replication solves one problem but still leaves one matter unsettled: the lagging strand will be composed of individual, unjoined fragments of DNA and RNA. This is where DNA polymerase I comes into pl ...

找到一个好东东，与大家分享真核细胞DNA的制备与定量制备基因组DNA是进行基因结构和功能研究的重要步骤，通常要求得到的片段的长度不小于100-200kb。在DNA提取过程中应尽量避免使DNA断裂和降解的各种因素，以保证DNA的完整性，为后续的实验打下基础。一般真核细胞基因组DNA有107-9bp，可以从新鲜组织、培养细胞或低温保存的组织细胞中提取，常是采用在EDTA以及SDS等试剂存在下用蛋白酶K消化细胞，随 ...

最近由于实验需要, 需要查阅载体图谱, 到园子里搜罗一番, 发现虽然有人问载体图谱阅读的问题, 也有前辈回答, 但都不详细, 借自己也在琢磨这个问题的机会, 将我学到的东西整理一下, 于大家分享, 也算我对 DXY 的一点小小贡献!载体主要有病毒和非病毒两大类, 其中质粒 DNA 是一种新的非病毒转基因载体。一、一个合格质粒的组成要素1、复制起始位点 Ori 即控制复制起始的位点。原核生物 DNA 分子中只有一个复制起始点。而真核生物 DNA 分子有多个复制起始位点。2、抗生素抗性基因 可以便于加 ...

真核细胞DNA的制备与定量制备基因组DNA是进行基因结构和功能研究的重要步骤，通常要求得到的片段的长度不小于100-200kb。在DNA提取过程中应尽量避免使DNA断裂和降解的各种因素，以保证DNA的完整性，为后续的实验打下基础。一般真核细胞基因组DNA有107-9bp，可以从新鲜组织、培养细胞或低温保存的组织细胞中提取，常是采用在EDTA以及SDS等试剂存在下用蛋白酶K消化细胞，随后用酚抽提而实现的。这一方 ...

李再新 张富春（新疆大学生命科学与技术学院分子生物学重点实验室 乌鲁木齐 830046）自Wolff等1990年发现DNA能够刺激机体产生免疫效应以来,在全世界范围内迅速掀起了一股DNA疫苗研究热。在近十年的时间里,科学工作者在鼠、鸡、猪、牛、猫、猴和黑猩猩等动物中进行了广泛深入的抗病毒、抗细菌、抗寄生虫、抗肿瘤及免疫不育的DNA疫苗研究。由于DNA疫苗能诱导机体产生体液免疫和细胞免疫,并兼有减毒活疫苗的有效性和亚单位疫苗 ...

Methylation Specific PCRProtocol written by James HermaundefinedMethylation Specific PCR (MSP) is a simple rapid and inexpensive method to determine the methylation status of CpG islands. This approach all ...

Protocols Downloadprotocol183kb pdf?Abstract for Gel Shift Assay SystemsThe gel shift or electrophoretic mobility shift assay provides a simple and rapid method for detecting DNA-binding proteins. Thi ...

分子克隆常用载体　　DNA片段的克隆需要合适的载体，载体或是质粒，或是噬菌体，或是病毒，通常大多经过人工改造一、质粒常用的有pBR322，pUC系列质粒等。（一）pBR322质粒是4362bp的环状双链DNA载体，有2个抗药性基因（四环素和氨苄青霉素），一个复制起始点和多个用于克隆的限制酶切点。当缺失抗药性基因的大肠杆菌被pBR322成功地转化时，它便从该质粒获得了抗生素抗性。两个抗生素基因中均含 ...

Scanning the human genome with combinatorial transcription factor librariesPublished online: 18 February 2003 doi:10.1038/nbt794March 2003 Volume 21 Number 3 pp269-274Pilar Blancafort Laurent Magne ...

Human zinc fingers as building blocks in the construction of artificial transcription factorsKwang-Hee Bae1 4 Young Do Kwon1 2 4 Hyun-Chul Shin1 Moon-Sun Hwang1 Eun-Hyun Ryu1 Kyung-Soon Park1 Hyo-Youn ...

人工设计转录因子来调控目标基因的表达已经不是梦想，基于锌指蛋白结构域的设计已经展开。锌指蛋白结构域能够结合于特定的三个碱基配对的DNA序列上。RNA干扰和反义核酸技术能够抑制基因的表达，而人工设计转录因子能够升高目标基因的表达，从而为疾病的新治疗方法开辟了新的思路。Nature Biotechnology上新发表的两篇文章为基于锌指蛋白结构域的转录因子设计提出了新的观点。 Kim ...

一、兼并引物（Degenerate Primer）PCR　　密码子具有兼并性，如表22-4，单以氨基酸顺序推测编码的DNA序列是不精确的，但可以设计成对兼并引物，扩增所有编码已知顺序的核酸序列。用兼并引物时寡核苷酸中核苷酸序列可以改变，但核苷酸的数量应相同。兼并度越低，产物特异性越强，设计引物时应尽量选择兼并性小的氨基酸，并避免引物3’末端兼并，针对兼并的混合引物已成功地用于未知靶DNA的扩增、克 ...

聚丙烯酰胺凝胶电泳是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的电泳方法。在这种支持介质上可根据被分离物质分子大小和分子电荷多少来分离。聚丙烯酰胺凝胶有以下优点：①聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺和N，N'甲叉双丙烯酰胺聚合而成的大分子。凝胶有 格子是带有酰胺侧链的碳-碳聚合物，没有或很少带有离子的侧基，因而电渗作用比较小，不易和样品相互作用。②由于聚丙烯酰胺凝胶是一种人工合成的物质，在聚合前可调节单体的浓度比，形成 ...

为了获得高质量的真核细胞mRNA， 必须使用RNA酶的抑制剂或采用下述的破碎细胞和灭活RNA酶同步进行的方法，最大限度地降低细胞破碎过程中所释放的RNA酶的活性。同时，避免偶然引入实验室内其他潜在的痕量RNA酶也很重要。下面列举避免RNA酶法染问题的一些注意事项。大多数有经验的研究者并不拘泥于这些注意事项，只是在遇到问题时可能采用其中的一种或几种方法加以解决。实验程序RNA酶的抑制剂破碎细胞和灭 ...

外源ＤＮＡ片段和线状质粒载体的连接，也就是在双链ＤＮＡ５'磷酸和相邻的3'羟基之间 形成的新的共价链。如质粒载体的两条链都带5'磷酸，可生成４个新的磷酸二酯链。但如果质粒ＤＮＡ已去磷酸化，则吸能形成２个新的磷酸二酯链。在这种情况下产生的两个杂交体分子带有２个单链切口，当杂本导入感受态细胞后可被修复。相邻的５'磷酸和３'羟基间磷酸二酯键的形成可在体外由两种不同的ＤＮＡ连接酶催化，这两种酶就是大肠杆菌 ...

经乙二醛和二甲基亚砜变性处理后进行的RNA电泳 　　这一方法原于McMaster和Carmichael(1977)。 含有乙二醛－DMSO的凝胶比含有甲醛的凝胶更难于进行电泳， 因为前者泳动速率较慢而且需将电泳液时行循环以避免电泳过程中形成过高的H＋梯度。尽管上述两种凝胶具有近乎相等的分辨率（Miller，1987），但用含朋乙二醛－DMSO的凝胶对RNA进行分级离，通常Northern杂交所显示 ...

电泳法，是指带电荷的供试品（蛋白质、核苷酸等）在惰性支持介质（如纸、醋酸纤维素、琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等）中，于电场的作用下，向其对应的电极方向按各自的速度进行泳动，使组分分离成狭窄的区带，用适宜的检测方法记录其电泳区带图谱或计算其百分含量的方法。 电泳技术的基本原理和分类　　在电场中，推动带电质点运动的力（F）等于质点所带净电荷量（Q）与电场强度（E）的乘积。F＝QE质点的前移同样要受 ...