DNA重组

Assay Design for MIP GenotypingDescription: For each SNP a single MIP probe is designed. A minimum of 5000 probes are designed as a probe set.1) MIP probe designTwo homologies are designed that abut, but do not overlap the SNP. The tag sequence, two primer sequences and a restriction sequence are added to ...

Perlegen Assay Design ProtocolDescription: Long-range PCR assays were designed using Oligo primer design software(Molecular Biology Insights). Primers were selected to have similarstringency and to map uniquely to NCBI Build 33. From a collection ofall suitable candidate pri ...

限制性内切酶综述(Restriction Endonucleases: An Overview)30多年前，当人们在对噬菌体的宿主特异性的限制-修饰现象进行研究时，首次发现了限制性内切酶。细菌可以抵御新病毒的入侵，而这种"限制"病毒生存的办法则可归功于细胞内部可摧毁外源DNA的限制性内切酶。首批被发现的限制性内切酶包括来源于大肠杆菌的EcoR I和EcoR II，以及来源于Heamophilus influenzae的Hind II和H ...

SNPs概念(single nucleotide polymorphism ， SNP，发音为“snips”), 主要是指在基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起的 DNA 序列多态性。它是人类可遗传的变异中最常见的一种。占所有已知多态性的 90% 以上。 SNP 在人类基因组中广泛存在，平均每 500 ～ 1000 个碱基对中就有 1 个，估计其总数可达 300 万个甚至更多。 SNP 所表现的多态性只涉及到单个碱基的变异，这种变异可由单个碱基的转换 (transition) 或颠换 (transvers ...

基因工程:有目的的通过分子克隆技术，人为的操作改造基因，改变生物遗传性状的系列过程。载体:能在连接酶的作用下和外源DNA片段连接并运送DNA分子进入受体细胞的DNA分子。转化:指质粒DNA或以它为载体构建的重组DNA导入细菌的过程。感染:以噬菌体、粘性质粒和真核细胞病毒为载体的重组DNA分子，在体外经过包装成具有感染能力的病毒或噬菌体颗粒，才能感染适当的细胞，并在细胞内扩增。转导:指以噬菌体为载体，在细菌之间转移 ...

SNP 检测方法及研究现状 SNP 是指基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起的DNA 序列多态性,在群体中的发生频率不小于1 %。包括单个碱基的转换、颠换、插入和缺失等。所谓转换是指同型碱基之间的转换,如嘌呤与嘌呤( G2A) 、嘧啶与嘧啶( T2C) 间的替换;所谓颠换是指发生在嘌呤与嘧啶(A2T、A2C、C2G、G2T) 之间的替换。依据排列组合原理,SNP 一共可以有6种替换情况,即A/ G、A/ T、A/ C、C/ G、C/ T 和G/ T ,但事实上,转换的发生频率占多数,而且是C2T 转换为主, ...

SNP 研究相关概述 SNPs是指DNA序列上发生的单个核苷酸碱基之间的变异,在人群中这种变异的发生频率至少大于1%, 它是基因组中存在的一种数量非常丰富的变异形式,占人类基因组中遗传多态性的90％以上。针对不同人种基因组的测序结果表明,在人类群体中存在大约1000万个SNP位点,在公共数据库中至少有500多万个SNPs已被报道,SNPs在基因组的分布密度达到每300-500个碱基就存在一个SNP。1. SNPs检测技术的进 ...

一．Pyrosequencing技术用于炭疽热细菌的鉴定： 以下方案指出了以前用于炭疽热细菌鉴定方案的局限性，这些方案有抗体检测的诊断方法， 16S rRNA基因的序列分析， DNA杂交， gamma phage sensitivity tests和carbohydrate profiles等。该方案肯定了利用pyrosequencing鉴定细菌的优势。鉴定炭疽热细菌Bacillus anthracis的最新方案利用PSQ 96 DNA分析系统，基于D ...

测序（sequencing）技术 在分子生物学研究中，DNA的序列分析是进一步研究和改造目的基因的基础。目前用于测序的技术主要有Sanger等（1977）发明的双脱氧链末端终止法和Maxam和 Gilbert（1977）发明的化学降解法。这二种方法在原理上差异很大，但都是根据核苷酸在某一固定的点开始，随机在某一个特定的碱基处终止，产生A，T，C，G四组不同长度的一系列核苷酸，然后在尿素变性的PAGE胶上电泳进行检测，从而 ...

基因克隆的常用方法基因(gene)是遗传物质的最基本单位,也是所有生命活动的基础。不论要揭示某个基因的功能,还是要改变某个基因的功能,都必须首先将所要研究的基因克隆出来。特定基因的克隆是整个基因工程或分子生物学的起点。本文就基因克隆的几种常用方法介绍如下。 　　1　根据已知序列克隆基因 　　　　对已知序列的基因克隆是基因克隆方法中最为简便的一种。获取基因序列多从文献中查取,即将别人报道的基因序列直接作为自己克隆的依据。现在国际上公开 ...

Growth and storage of Agrobacterium tumefaciens(农杆菌培养及转化)Strain GV3101: resistant to gentamycin and rifampicin so add 25-50 ug/ml Gentamycin, 10 ug/ ml rifampicin on plates or in liquid media for selection. GV3101 is sensitive to kanamycin (or chloramphenicol), so is a good strain for use w ...

磷酸钙-DNA共沉淀法 核酸以磷酸钙-DNA共沉淀物的形式出现时，可使DNA附在细胞表面，利于细胞吞入摄取，或通过细胞膜脂相收缩时裂开的空隙进入细胞内，进入细胞的DNA仅有1%～5%可以进入细胞核中，其中仅有不到1%的DNA可以与细胞DNA整合，在细胞中进行稳定表达，基因转导的频率大约为10-4，这项技术能用于任何DNA导入哺乳类动物进行暂时性表达或长期转化的研究。此方法对于贴壁细胞转染是最常用并首选的方法。 1、配液 (1)2 ...

DNA walkA DNA walk of a genome represents how the frequency of each nucleotide of a pairing nucleotide couple changes locally. This analysis implies measurement of the local distribution of Gs in the content of GC and of Ts in the content of TA. Lobry was the first to propose this analysis (1996, 1999). Two com ...

A Rapid Analysis of Human Paraoxonase Gene Cluster Polymorphism人芳香二烷基磷酸酯酶基因丛基因多态性快速分析法摘要：目的　建立一种人芳香二烷基磷酸酯酶(PON)基因丛等位基因快速分型法。方法　在Multiplex-PCR-RELP基础上，通过引物设计错配，在一体系中同时扩增分别含PON1-192、PON1-55和PON2-31l位密码子的DNA片段，当等位基因为PON1-192R/PON1- ...

DNA walks and their transformationsGraphic representation of coding DNA sequences - a spider To make a graphic representation of a coding DNA sequence in two dimensional space, we analyzed the displacement of a DNA walker which checked each position of codons separately. For the DNA walk we have ...

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1. RESTRICTION:Use 5mg genomic DNA for Southern hybridization. Aliquot DNA in H20: Total Vol 100l .Add 100l Mix.TOTAL VOL: 200l MIX: Add 100 units per sample of each restriction enzyme.Add ...

Methylated CpG island AmplificationProtocol written by Minoru Toyota2. Materials2.1. MCARestriction enzymes SmaI XmaIT4 DNA ligaseTaq DNA polymerase10X PCR reaction buffer:670mM Tris-HCl pH 8.840mM M ...