DNA重组

一、目的与原理当细菌处于容易吸收外源DNA的状态时，即为感受态，而用理化手段使细菌处于感受态的操作为致敏过程。感受态细胞制备是重组基因能否实现转化的一个重要的技术环节。本试验是通过钙离子来诱导使之成为感受态细胞。二、材料和方法1． 材料：大肠杆菌2． 仪器：离心机，恒温摇床，恒温水浴，超净工作台，冰柜3． 试剂LB培养基，0.1M MgCl2，3mM氯化六氮合高钴TFB：10Mm MES（pH6. ...

一、目的与原理转化是指以质粒DNA或以它为载体构建的重组子导入细菌的过程。转化技术在基因工程领域中占有极重要的地位。目前用得较多的转化技术为将人工构建的重组质粒到如受体细胞，使重组质粒在受体细胞中稳定地复制和表达。二、材料和方法1.材料：大肠杆菌2.仪器：离心机，恒温摇床，恒温水浴，超净工作台，冰柜3.试剂LB培养基; 0.1M mM CaCl2 ; 0.1M MgCl2 ; TFB：10mM M ...

一、目的与原理转化是指以质粒DNA或以它为载体构建的重组子导入细菌的过程。转化技术在基因工程领域中占有极重要的地位。目前用得较多的转化技术为将人工构建的重组质粒到如受体细胞，使重组质粒在受体细胞中稳定地复制和表达。二、材料和方法1.材料：大肠杆菌2.仪器：离心机，恒温摇床，恒温水浴，超净工作台，冰柜3.试剂LB培养基; 0.1M mM CaCl2 ; 0.1M MgCl2 ; TFB：10mM M ...

Simple and Efficient Method (SEM) to Make Competent Cells Preparation of Frozen Competent of DH5α 1) 250 ml TB solution 10mM Pipes or 10 mM Hepes 0.65g 15 mM CaCl2 0.55g 250 mM KCl 4.66g *55 mM MnCl2 ...

Simple and Efficient Method (SEM) to Make Competent Cells Preparation of Frozen Competent of DH5α 1) 250 ml TB solution 10mM Pipes or 10 mM Hepes 0.65g 15 mM CaCl2 0.55g 250 mM KCl 4.66g *55 mM MnCl2 ...

Growth and storage of Agrobacterium tumefaciensStrain GV3101: resistant to gentamycin and rifampicin so add 25-50 ug/ml Gentamycin 10 ug/ ml rifampicin on plates or in liquid media for selection. GV31 ...

TSS方法制备感受态细菌（又称一步法）一、准备工作1、缓冲液1×TSS的配制：事先配制1M的氯化镁――20.3g氯化镁(6分子水结晶)/定容于100ml去离子水后封装，不用灭菌。取干净的100ml 量筒和100ml 烧杯，用量筒量取100ml去离子水，加入至烧杯中，取 1 g 蛋白胨，0.5g 酵母抽提物，0.5g 氯化钠，10 g PEG(MW= 3350) 5ml DMSO，5ml 的 ...

Growth and storage of Agrobacterium tumefaciensStrain GV3101: resistant to gentamycin and rifampicin so add 25-50 ug/ml Gentamycin 10 ug/ ml rifampicin on plates or in liquid media for selection. GV31 ...

TSS方法制备感受态细菌（又称一步法）一、准备工作1、缓冲液1×TSS的配制：事先配制1M的氯化镁――20.3g氯化镁(6分子水结晶)/定容于100ml去离子水后封装，不用灭菌。取干净的100ml 量筒和100ml 烧杯，用量筒量取100ml去离子水，加入至烧杯中，取 1 g 蛋白胨，0.5g 酵母抽提物，0.5g 氯化钠，10 g PEG(MW= 3350) 5ml DMSO，5ml 的 ...

我用了快4个月这个试剂盒了，下面是一些总结出来的经验，我现在诱变每次都很成功了，呵呵：）1. 我溶NaOH的水PH值大概在6.5左右，所以我每次调Reagent I的时候3MNaO0H基本都要加150uL左右。2. 解链时用50度水浴15分钟。3. 加入Reagent I后，50度水浴16小时。4. 加入Reagent II和III后，室温孵育10分钟5. 第一次离心用9000 rpm 5分钟。6 ...

我用了快4个月这个试剂盒了，下面是一些总结出来的经验，我现在诱变每次都很成功了，呵呵：）1. 我溶NaOH的水PH值大概在6.5左右，所以我每次调Reagent I的时候3MNaO0H基本都要加150uL左右。2. 解链时用50度水浴15分钟。3. 加入Reagent I后，50度水浴16小时。4. 加入Reagent II和III后，室温孵育10分钟5. 第一次离心用9000 rpm 5分钟。6 ...

BioGene-ExpuzeTMDNA 10分钟快速提取试剂盒中文说明书从全血样本提取DNA的操作规程1、在离心管中加入900 µl的溶液 1及250-300 µl的全血，振荡30秒。2、离心（9000 rpm，1分钟），倒掉上清液。3、先至少振荡30秒，以打破Pellet。4、加入400 µl 溶液2，振荡20秒使Pellet完全溶解（在光线下溶液应清亮透明） ...

1)取30ml蓝藻溶液于10000rpm离心15分钟，将沉淀小心转至1.5mlEppendorf管中；2)用1 mlTE(PH8.0)洗沉淀，12000rpm离心10分钟，弃上清；加240μL BufferA和60μL的5M NaCl每管加Sarkosyl(原浓度是10％)至终浓度为0.1%。3)于4℃保温1小时；12000rpm离心2分钟，取沉淀。以500μL溶液（由49.99ml Buffer ...

1)取30ml蓝藻溶液于10000rpm离心15分钟，将沉淀小心转至1.5mlEppendorf管中；2)用1 mlTE(PH8.0)洗沉淀，12000rpm离心10分钟，弃上清；加240μL BufferA和60μL的5M NaCl每管加Sarkosyl(原浓度是10％)至终浓度为0.1%。3)于4℃保温1小时；12000rpm离心2分钟，取沉淀。以500μL溶液（由49.99ml Buffer ...

DNA测序样品用什么溶液溶解比较好? 答：溶解DNA测序样品时用灭菌蒸馏水溶解最好。DNA的测序反应也是Taq酶的聚合反应需要一个最佳的 酶反应条件.如果DNA用缓冲液溶解后在进行了测序反应时DNA溶液中的缓冲液组份会影响测序反应的体 系条件造成Taq酶的聚合性能下降。 有很多客户在溶解DNA测序样品时使用TE Buffer。的确，TE Buffer能增加DNA样品保存期间的稳定性， 但TE ...

载体主要有病毒和非病毒两大类其中质粒DNA是一种新的非病毒转基因载体。一、一个合格质粒的组成要素复制起始位点Ori 即控制复制起始的位点。原核生物DNA分子中只有一个复制起始点。而真核生物DNA分子有多个复制起始位点。抗生素抗性基因 可以便于加以检测，如Amp+ Kan+多克隆位点MCS 克隆携带外源基因片段P/E 启动子/增强子Terms 终止信号加poly（ ...

1．感受态的制备　　（1）接种单菌落于2ml LB培养液中， 37℃过夜。　　（2）取0.25ml过夜菌入25ml LB培养液中，37℃振摇4～6h至A590=0.4～0.6。　　（3）倒入50ml管内，水浴10min，以2500～3000rpm离心5min，弃上清。　　（4）缓慢加入75mmol/L预冷CaCl25ml悬浮菌体，冰浴20min，同上离心弃上清。　　（5）缓慢加入75mmol/L预 ...

载体主要有病毒和非病毒两大类其中质粒DNA是一种新的非病毒转基因载体。一、一个合格质粒的组成要素复制起始位点Ori 即控制复制起始的位点。原核生物DNA分子中只有一个复制起始点。而真核生物DNA分子有多个复制起始位点。抗生素抗性基因 可以便于加以检测，如Amp+ Kan+多克隆位点MCS 克隆携带外源基因片段P/E 启动子/增强子Terms 终止信号加poly（ ...

1．感受态的制备　　（1）接种单菌落于2ml LB培养液中， 37℃过夜。　　（2）取0.25ml过夜菌入25ml LB培养液中，37℃振摇4～6h至A590=0.4～0.6。　　（3）倒入50ml管内，水浴10min，以2500～3000rpm离心5min，弃上清。　　（4）缓慢加入75mmol/L预冷CaCl25ml悬浮菌体，冰浴20min，同上离心弃上清。　　（5）缓慢加入75mmol/L预 ...

我做了稳定转染，从G418浓度确定到最后的单克隆化鉴定。有自己的体会也有其他战友遇到的情况 和大家分享. 没有总结好的地方，大家补充。筛选之前确定G418浓度：1，由于每种细胞对G418的敏感性不同，而且不同的厂家生产的G418有效成分的比重不同，一般1g的粉剂中有效的G418含量大约为0.722g。2，G418是新霉素的类似物，两者都是通过抑制核糖体的功能和蛋白质的合成而杀死细胞的。但是新霉素对 ...