质粒

最近看了一篇关于碱法抽提质粒的文章，觉得很好，特拿出来和各位分享。碱裂解法从大肠杆菌制备质粒，是从事分子生物学研究的实验室每天都要用的常规技术。可以我收研究生十几年了，几乎毫无例外的是我那些给人感觉什么都知道的优秀学生却对碱法质粒抽提的原理知之甚少。追其原因，我想大概是因为《分子克隆》里面只讲实验操作步骤，而没有对原理进行详细的论述。这是导致我的学生误入歧途的主要原因。后来我发现其实是整个中国的相关领域的研究 ...

碱法质粒抽提用到三种溶液：溶液I，50 mM葡萄糖 / 25 mM Tris-Cl / 10 mM EDTA，pH 8.0；溶液II，0.2 N NaOH / 1% SDS；溶液III，3 M 醋酸钾 / 2 M 醋酸。具体分析及原理:1，25 mM Tris-Cl。控制溶液的pH。2，50 mM葡萄糖。悬浮后的大肠杆菌不会快速沉积到管子的底部。3，10 mM EDTA，pH 8.0。EDTA是Ca2+和Mg2+等二价金属离子的螯合剂，抑制DNase的活性，和抑制微生物生长。在溶液I中加入高达 10 mM 的EDTA，是要把大肠杆菌细胞中的所有 ...

BL21BL21（DE3）BL21 Plyss（DE3）BL21Condon Plus (DE3)BL21-AI（DE3）BL21-Trxb（DE3）BL21 gold Plyss（DE3）AD494（DE3）TB1(DE3)C41(DE3）C43(DE3）Rosetta（DE3）Rosetta2（DE3） PlyssOrigami B (DE3)Rosetta-gami-B（DE3）Rosetta-gami-B Plyss（DE3）DH5αTop10Top10F' ...

一、一个合格质粒的组成要素复制起始位点Ori 即控制复制起始的位点。原核生物DNA分子中只有一个复制起始点。而真核生物DNA分子有多个复制起始位点。抗生素抗性基因 可以便于加以检测，如Amp+ ,Kan+多克隆位点MCS 克隆携带外源基因片段P/E 启动子/增强子Terms 终止信号加poly（A）信号 可以起到稳定mRNA作用二、如何阅读质粒图谱第一步：首先看Ori的位置，了解质粒的类型（原核/真核/穿梭质粒）第二步：再看筛选标记，如抗性，决 ...