质粒

题录集：静脉大容量快速注射siRNA或质粒有些老师曾经认为通过小鼠尾静脉注射200微升质粒液体都很困难。而现在，小鼠尾静脉注射1.3毫升的siRNA或质粒已经快成了在整体动物水平快速鉴定某个基因功能的标准手段。这种大容量快速注射还可以用于兔子、狗等大型动物。除了尾静脉是可以输入核酸的路径之外，还可以通过门静脉、肾静脉、下肢静脉等进行局部灌注。所以，以前用于反义核酸(ODN)的一些体内delivery手段，还可以 ...

刚进实验室学技术 ，看到复旦大学某教授写的有关质粒的好文，贴在这里与大家共享（最后的问题也希望各位能解答一下：）：从质粒抽提谈起碱裂解法从大肠杆菌制备质粒，是从事分子生物学研究的实验室每天都要用的常规技 术。可以我收研究生十几年了，几乎毫无例外的是我那些给人感觉什么都知道的优秀学生 却对碱法质粒抽提的原理知之甚少。追其原因，我想大概是因为《分子克隆》里面只讲实 验操作步骤，而没有对原理进行详细的论述。这是导致我的学生误入歧途的 ...

（一）外源ＤＮＡ和质粒载体的连接反应　　外源ＤＮＡ片段和线状质粒载体的连接，也就是在双链ＤＮＡ５'磷酸和相邻的3'羟基之间 形成的新的共价链。如质粒载体的两条链都带5'磷酸，可生成４个新的磷酸二酯链。但如果质粒ＤＮＡ已去磷酸化，则吸能形成２个新的磷酸二酯链。在这种情况下产生的两个杂交体分子带有２个单链切口，当杂本导入感受态细胞后可被修复。相邻的５'磷酸和３'羟基间磷酸二酯键的形成可在体外由两种不同的ＤＮＡ连接酶催化，这两 ...

第一章 质粒DNA的分离、纯化和鉴定第一节 概 述　　把一个有用的目的DNA片段通过重组DNA技术,送进受体细胞中去进行繁殖和表达的工具叫载体(Vector)。细菌质粒是重组DNA技术中常用的载体。　　质粒(Plasmid)是一种染色体外的稳定遗传因子,大小从1-200kb不等,为双链、闭环的DNA分子,并以超螺旋状态存在于宿主细胞中。质粒主要发现于细菌、放线菌和真菌细胞中，它具有自主复制和转录能力,能在子代细胞中保持恒定的拷贝数,并表达 ...

这是我第3天小提质粒了，每次最后看到的都是可怜的沉淀，心里也特别难受，可是难受也没有办法，需要的是冷静的分析原因，于是打算进行质粒大提了，还要把所有的试剂都重新配制，包括ＬＢ培养基。可在此之前，我想请教一下，碱变性法提取质粒各位都有什么地方是特别注意的。为我的最后大提请愿，希望顺利。1、我自己觉得首先是心态问题，说实话，这个实验我已经做了无数次了，这次是最失败的一次，３天连提都失败，本来国庆想休息一下的，现在彻底无望 ...

俺开始做实验已经快两个月了，郁闷死了！！！郁闷的原因拟另外发帖求助。做实验过程中自己翻译的一点说明书，贴出来方便一下后面的战友！QIANGEN Plasmid Midi and Maxi Kits 试剂盒说明书QIANGEN Plasmid Midi and Maxi Kits 试剂盒最大推荐培养容量QIAGEN-tip100QIAGEN-tip500高拷贝质粒25ml100ml低拷贝质粒100ml500ml对QIAGEN-tip100，预期产量是75—1 ...

1溶液配制:1.1 Buffer P1:(悬浮用)成分：50mM Tris.HCl, pH8.0, 10mM EDTA, 100ug/mL Rnase A配制：2M Tris.HCl, pH 8.025mL0.5M EDTA, pH 8.020mL双蒸水至 1L，灭菌。使用前每1L buffer加入100mg RNAse A，并于4℃保存。1.2 Buffer P2：（裂解用）成分：200mM NaOH, 1% SDS配制：8g NaOH固体溶解于500mL双蒸水中，成0.4M NaOH溶液10g SDS溶于500mL双蒸水中，成2% SDS ...

看到有很多人问质粒抽提的有关问题，恰巧手头上有一篇相关的文章　　　　　　　　　　　　　　　　 从质粒抽提谈起　　碱裂解法从大肠杆菌制备质粒，是从事分子生物学研究的实验室每天都要用的常规技术。可以我收研究生十几年了，几乎毫无例外的是我那些给人感觉什么都知道的优秀学生却对碱法质粒抽提的原理知之甚少。追其原因，我想大概是因为《分子克隆》里面只讲实验操作步骤，而没有对原理进行详细的论述。这是导致我的学生误入歧途的主要原因。后来我发现其实是整个中国的相关领域 ...

【鸡毛蒜皮】之巧用PCR—重组质粒的快速高通量筛选近几年，随着国内更多的公司掌握了Taq酶的制备技术，市场竞争进入白热化，Taq酶的价格一路猛跌，有的公司甚至推出跳楼价—1毛钱一单位。且不说具体哪个公司的质量好，单单从价格上就已经让人感觉到了类似北京冬天的大白菜和夏天的西红柿的味道。从另外一个方面来看，限制型内切酶的价格却多年不变，我们曾经一度以价格优势占领大片国内市场并把内切酶普及到更多实验室的华美公司近几 ...

网上有两种pGEX-KG序列，请各位准备使用该质粒的朋友们注意啊！SEQ1Addgene_VectorDB_5100 pGEX-KG 5006 base pairsacgttatcgactgcacggtgcaccaatgcttctggcgtcaggcagccatcggaagctgtggtatggctgtgcaggtcgtaaatcactgcataattcgtgtcgctcaaggcgcactcccgttctggataa ...

在园中看到有些战友对质粒提取的问题有些误解。现把我找到的关于质粒提取的原理列在下面，希望对大家有所帮助。碱裂解法从大肠杆菌制备质粒，是从事分子生物学研究的实验室每天都要用的常规技术。可是我收研究生十几年了，几乎毫无例外的是我那些给人感觉什么都知道的优秀学生却对碱法质粒抽提的原理知之甚少。追其原因，我想大概是因为《分子克隆》里面只讲实验操作步骤，而没有对原理进行详细的论述。这是导致我的学生误入歧途的主要原因。后 ...

质粒DNA的大量提取和纯化　　在制作酶谱、测定序列、制备探针等实验中需要高纯度、高浓度的质粒DNA,为此需要大量提取质粒DNA。大量提取的质粒DNA一般需进一步纯化,常用柱层析法和氯化绝梯度离心法。（一）、碱法　　1、取培养至对数生长后期的含质粒的细菌培养液400ml，4℃下5000转离心15分钟,弃上清,将离心管倒置使上清液全部流尽。2、称重一般为3-4g.　　2、将细菌沉淀物重新悬浮于4ml/1g溶液I中,充分悬浮菌体细胞。(该步骤很 ...

a．将0.1μl载体ＤＮＡ转移到无菌微量离心管中，加等摩尔量的外源ＤＮＡ。b．加水至7.5μl，于45℃加温５分钟以使重新退炎的粘端解链，将混合物冷却到０℃。c．加入：10xT4噬菌体ＤＮＡ连接酶缓冲液 １μlＴ４噬菌体ＮＤＡ连接酶 0.1Weiss单位５mmol/L ATP 1μl于16℃温育１－４小时10xT4噬菌体ＤＮＡ连接酶缓冲液200mmol/L同Tris.Cl(pH7.6)50mmol/K MgCl250mmol/L二硫苏糖醇5 ...

质粒提取的原理http://www.bioon.com 生 物 谷 网 站碱裂解法从大肠杆菌制备质粒，是从事分子生物学研究的实验室每天都要用的常规技术。可是我收研究生十几年了，几乎毫无例外的是我那些给人感觉什么都知道的优秀学生却对碱法质粒抽提的原理知之甚少。追其原因，我想大概是因为《分子克隆》里面只讲实验操作步骤，而没有对原理进行详细的论述。这是导致我的学生误入歧途的主要原因。后来我发现其实是整个中国的相关领域的研究生水平都差不多， ...

pEGFP-N1质粒图谱及信息多克隆位点区Restriction Map and Multiple Cloning Site of pEGFP-N1. (Unique restriction sites are in color or bold.) The Not I site follows the EGFP stop codon. The Xba I site ~undefined) is methylated in the DNA provided by CLONTECH. If you wish to digest the vector with this enzyme, you will need to transf ...

碱裂解法从大肠杆菌制备质粒，是从事分子生物学研究的实验室每天都要用的常规技术。每个曾经用碱法抽提过质粒朋友，希望你看本文后能有所收获。 为了方便理解，这里罗列一下碱法质粒抽提用到三种溶液：溶液I，50 mM葡萄糖 / 25 mM Tris-Cl / 10 mM EDTA，pH 8.0；溶液II，0.2 N NaOH / 1% SDS；溶液III，3 M 醋酸钾 / 2 M 醋酸。让我们先来看看溶液I的作用。任何生物化学反应，首先要控制好溶液的pH，因此用适当浓度的和适当pH值的Tris-Cl溶液，是再自然 ...

【交流】做了很多不一定清楚的知识----质粒提取的原理碱裂解法从大肠杆菌制备质粒，是从事分子生物学研究的实验室每天都要用的常规技术。可是我收研究生十几年了，几乎毫无例外的是我那些给人感觉什么都知道的优秀学生却对碱法质粒抽提的原理知之甚少。追其原因，我想大概是因为《分子克隆》里面只讲实验操作步骤，而没有对原理进行详细的论述。这是导致我的学生误入歧途的主要原因。后来我发现其实是整个中国的相关领域的研究生水平都差不多， ...

主要试剂及溶液的配制细菌培养基:1)LB液体培养基:胰蛋白胨10克酵母提取物5克氯化钠10克以950ml去离子水溶解，用5M的NaOH 调pH值至7.0(约0.2ml)，最后以去离子水定容至1L。高压灭菌15磅 20分钟，4℃保存。2)LB固体选择性培养基:LB液体培养基 1L琼脂 15g高压灭菌后，室温放置，待液体温度约50℃时， 加入50mg/ml的氨苄青霉素1ml，使氨苄青霉素的终浓度为50ug/ml。将培养基混匀后在超净台内分别倒 ...

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为了方便理解，这里罗列一下碱法质粒抽提用到三种溶液：溶液I，50 mM葡萄糖 / 25 mM Tris-Cl / 10 mM EDTA，pH 8.0；溶液II，0.2 N NaOH / 1% SDS；溶液III，3 M 醋酸钾 / 2 M 醋酸。让我们先来看看溶液I的作用。任何生物化学反应，首先要控制好溶液的pH，因此用适当浓度的和适当pH值的Tris-Cl溶液，是再自然不过的了。那么50 mM葡萄糖是干什么的呢？说起来不可思议，加了葡萄糖后最大的好处只是悬浮后的大肠杆菌不会快速沉积到管子的底部。因此，如 ...