DNA含量测定

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相关专题 实验九 外源基因在大肠杆菌中的诱导表达和降解物阻遏作用【实验目的】1.了解外源基因在原核细胞中表达的基础理论。2.掌握乳糖操纵子的调节机制和操作方法。【实验原理】1.外源基因在原核细胞中的表达蛋白质通常是研究的最终目标，因此蛋白质的表达在基因工程中占有非常重要的地位。常用的表达系统有原核细胞和真核细胞。原核细胞表达系统主要使用大肠杆 ...

相关专题 实验八 重组克隆筛选（酶切鉴定）【实验目的】1.掌握质粒提取的基本方法的原理；2.学习和掌握限制性内切酶的使用方法。【实验原理】重组克隆的筛选和鉴定是基因工程中的重要环节之一。不同的克隆载体和相应的宿主系统，其重组克隆的筛选和鉴定方法不尽相同。从理论上说，重组克隆的筛选是排除自身环化的载体、未酶解完全的载体以及非目的DNA片断插入的 ...

相关专题 实验七 质粒DNA的制备【实验目的】1.了解质粒的特性及其在分子生物学研究中的作用；2.掌握质粒DNA分离和纯化的原理；3.学习碱裂解法和煮沸法分离质粒DNA的方法。【实验原理】质粒是细菌内的共生型遗传因子，它能在细菌中垂直遗传并且赋予宿主细胞特定的表型。质粒载体是在天然质粒的基础上为适应实验室操作而进行人工构建的。与天然质粒相比质 ...

相关专题 实验五 PCR产物的TA克隆 (DNA的胶回收和连接)【实验目的】1.掌握DNA回收和连接的基本原理。2.学习和掌握PCR产物的T-vector克隆。【实验原理】1.DNA片段回收方法：DNA片段在适当浓度的琼脂糖凝胶中，通上一定电压进行电泳，不同大小的DNA分子由于迁移率的不同而分离开。切下带有所需DNA片段的凝胶，用冻融法、玻璃 ...

相关专题 实验四 逆转录PCR (RT-PCR)【实验目的】1．了解用逆转录PCR法获取目的基因的原理。2．学习和掌握逆转录PCR的技术和方法。【实验原理】聚合酶链式反应（PCR）过程利用模板变性，引物退火和引物延伸的多个循环来扩增DNA序列。因为上一轮的扩增产物又作为下一轮扩增的模板，是一个指数增长的过程，使其成为检测核酸和克隆基因的一种非 ...

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相关专题 　　DNA结构 — 概述 　　DNA由两个链状分子(多聚核苷酸)围绕彼此旋转，形成了典型的双螺旋结构。细胞通过把四种核苷酸连接在一起形成多聚核苷酸链。用来构建DNA链的核苷酸有腺嘌呤(A)，鸟嘌呤(G)的胞嘧啶(C)和胸腺嘧啶(T)。DNA储存用来制造细胞使用的多肽的信息。DNA链上核苷酸的顺序(称为基因)说明了多肽链上的氨基酸的 ...

相关专题 DNA双螺旋结构的前前后后 　　DNA双螺旋结构：极其复杂的新发现 　　DNA双螺旋结构是有史以来最伟大的科学发现之一。DNA分子是建立每个生物体生理特征的最著名的遗传分子，它是由詹姆斯•沃森和弗朗西斯•克里克在1953年发现的。直到2001年中期，人类基因组计划和塞莱拉基因组公司才联合发表了DNA分子的真正性质 ...

相关专题 　　简并引物设计的方法(包括实际操作步骤)简并引物是指用来编码一段短肽序列的不同碱基序列的混合物。主要用来同源克隆未知的基因，或用来分析某一种基因多态性的一种方法。 　　简并引物设计的常见程序如下： 　　1. 利用NCBI搜索不同物种中同一目的基因的蛋白或cDNA编码的氨基酸序列。 　　因为密码子的关系，不同的核酸序列可能表达的氨 ...

相关专题 　　引物设计原则： 　　1。长度 一般为15-30bp，常用的是18-27bp，但不能大于38，因为过长会导致其延伸温度大于74℃，即Taq酶的最适温度 　　2。碱基分布的均衡性 同一碱基连续出现不应超过5个 　　GC含量一般40-60% 　　GC含量太低导致引物Tm值较低，使用较低的退火温度不利于提高PCR的特异性 　　GC含量 ...

相关专题 引物设计 问题四：如何利用MRNA序列和DNA序列，用PRIMER 5查找已知引物的产物位置，并确定其是否跨内含子。 1)找到目的引物的DNA序列和MRNA(cdna)序列，以问题三中用primer-blast设计的第8条引物为例。 2)打开PRIMER 5，将CDNA序列贴入-》点击primer-》显示primer primer ...

相关专题 引物设计 什么是引物二聚体?怎样消除引物二聚体? 引物二聚体是引物的3'端间相互错配扩增形成的。引物二聚体的出现是必然的，只是或多或少的问题，电泳时看不到引物二聚体带也不代表没有二聚体出现，只是含量低我们 的肉眼看不到而已。提高PCR严谨性(包括提高退火温度，降低引物浓度等)可大大降低二聚体的浓度。 减少PCR产物中引物二聚 ...

相关专题 引物在PCR反应中处于关键作用，引物决定着扩增的特异性和扩增的效率。而在目前DNA的化学合成技术非常成熟的情形下，引物设计是否合适是我们应更为关注的层面。现在有很多的免费的软件或网络资源(http://frodo.wi.mit.edu/primer3/)能辅助我们进行引物设计，这使我们总能找到适合我们自己应用的引物设计工具。笔者用 ...

相关专题 引物设计 测序引物设计时的注意事项： 1， 对特异性的标准掌握更严格一些，也比普通PCR引物设计时更优先考虑特异性。因为如果在测序反应中，如果引物与模板在非预期位置退火并引发链延伸，会对结果对来很大的干扰甚至造成结果无法识读。 2， Tm值适当高一些。现在大部分测序反应均选用耐热的测序级DNA聚合酶来催化，并采用PCR的热循环程序。 ...

相关专题 DNA双螺旋结构的前前后后 我们拟提出脱氧核糖核酸(DNA)盐的一种结构。这种结构的崭新特点具有重要的生物学意义。 鲍林和考瑞曾提出过一个核酸结构。他们在发表这一结构之前，欣然将手稿送给我们一阅。他们的模型包含磷酸接近纤维袖，碱基在外周的三条多核苷酸链。我们觉得这样的结构是不够满意的，其理由有二：(1)我们认为进行过X射线衍射分析 ...

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