DNA标记

BAC提取前准备（前两天 ） 配制含25 mg/l Kan的LB培养基选择平板，在超净工作台上用接种环从购买的BAC划线接种至选择平板，于37℃培养箱培养过夜，供选择单。 BAC提取前准备（前一天） 1、在超净工作台上，用50 µg/ml Kan和液体LB培养基配制成25 mg/l Kan培养基，每个Falcon试管分装10 ml。也可先分装10 ml无抗生素的液体LB培养基后，然后每 ...

一．农杆菌感受态细胞的制备 （同大肠杆菌质粒DNA的提取），然后将其转化大肠杆菌，再提取大肠杆菌的质粒DNA进行酶切鉴定。 取-70℃保存的EHA105于含有50μg/ml链霉素平板划线，28℃培养2天。挑单菌落接种于5ml YM（0.5g/L KH2 PO4 10 g/L Mannitol2 g/L L-Glutamine0.2 g/L NaCL0.2 g/L MgSO4 0.3 g/L ...

现代分子生物学研究发现，中药材(不含矿物药)所依赖的生物资源――“物种”的多样性是由于其基因多态性的结果，而基因多态性可在分子水平上检测，它比在形态、组织和化学水平上检测更能代表其变异类型的遗传标记。传统的分子标记主要有血清学特征、蛋白质谱 、同工酶谱，近10年来则有迅速发展起来的DNA 分子标记，现介绍如下。 1 　传统的分子标记 1.1　抗血清　中药有许多具有抗原决定 ...

Pyrosequencing是对短到中等长度的DNA序列样品进行高通量的、精确和重复性好的分析的技术。 第一步——测序引物和PCR扩增的、单链的DNA模板杂交，与酶—DNA聚合酶（DNA polymerase）、ATP硫酸化酶（ATP sulfurylase）、荧光素酶（luciferase）、三磷酸腺苷双磷酸酶（apyrase）—和底物&mdash ...

摘要： DNA 甲基化是表观遗传学(Epigenetics)的重要组成部分，在维持正常细胞功能、遗传印记、胚胎发育以及人类肿瘤发生中起着重要作用，是目前新的研究热点之一。随着对甲基化研究的不断深入，各种各样甲基化检测方法被开发出来以满足不同类型研究的要求。这些方法概括起来可分为三类：整体水平的甲基化检测、基因特异位点甲基化的检测和新甲基化位点的寻找。本篇将主要介绍目前存在的大部分DNA 甲基化研究 ...

本法的产量要低得多，但却比本章所述的其他方法更温和，是提取大质粒(大于15kb)的首选方法。 试验步骤: 1、将500ml细菌沉淀物洗过后重悬于10ml用冰预冷的10%蔗糖、50mmol/L Tris.Cl(pH8.0)溶液中，将悬液移至30ml的带盖螺口塑料试管中。 2、加入2ml新配制的溶菌酶溶液。当溶液的pH值小于8.0时，溶菌酶不能有效地发挥作用。 3、加8ml 0.25mol/L EDT ...

一、目的 鉴定载体与目的基因是否已经成功连接成新的重组质粒。 二、原理 载体pUC18具有一个EcoRI 和HindIII的单酶切位点，含氨苄青霉素抗性基因。目的基因设计时分别在上、下游引物中加入了EcoRI 和HindIII单酶切位点，两者双酶切后，经连接酶连接，连接成功就形成了新的重组质粒。 在含50μg/ml Amp、40ml X-gal 储液和4μlIPTG 储液LB 固体平皿 ...

1.Safety precautions Hoechst 33258 is carcinogen and toxic.Use with adequate ventilation.Avoid contact with eyesskinclothing.Wash after handling.Keep container closed. 2.Rationale For biochemical qu ...

一、核酸的纯化 在分子克隆的所有操作中，最基本的操作是核酸的纯化。其关键步骤是去蛋白质，通常只要用酚/氯仿。氯仿抽提核酸的溶液即可。每当需要把克隆有某一些所用的酶灭活或去除以便进行下一步时，可进行这种抽提。然而，如要从细胞裂解液等复杂的分子混合物中纯化核酸，则要先用某些蛋白水解酶消化大部分蛋白质后，再用有机溶剂抽提。这些广谱的蛋白酶包括链霉蛋白酶及蛋白酶K等，它们对多种天然蛋白均有活性，（1）用酚 ...

试验原理: 大量提取的质粒DNA一般需进一步纯化常用柱层析法和氯化铯梯度离心法。常使用的所有纯化方法都利用了质粒DNA 相对较小及共价闭合环状这样两个性质。例如用氯化铯-溴化乙锭梯度平衡离心分离质粒和染色体DNA 就取决于溴化乙锭与线状以及与闭环DNA分子的结合量有所不同。 溴化乙锭通过嵌入碱基之间而与DNA结合进而使双螺旋解旋。由此导致线状DNA的长度有所增加作为补偿将在闭环质粒DNA中引入超螺 ...

DNA sequencing is the determination of the precise sequence of nucleotides in a sample of DNA. The most popular method for doing this is called the dideoxy method. The equipment and supplies:·S ...

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重组DNA转化受体细胞后，须在不同水平上进行筛选，以区别转化子与非转化子、重组子与非重组子以及鉴定所需的特异性重组子。在转化过程中，并非每个受体细胞都被转化；即使获得转化细胞，也并非都含有目的基因，所以需采用有效方法进行筛选。筛选的方法包括根据遗传表型筛选、限制性内切酶分析筛选、核酸探针筛选、PCR筛选等。本实验采用遗传表型筛选中的抗生素平板筛选或α互补筛选的方法。 一、抗生素平板筛 ...

体外连接的DNA重组分子导入合适的受体细胞才能大量增殖。为了提高受体菌摄取外源DNA的能力，提高转化效率以获得更多的转化子，人们摸索出了不同的方法处理细菌，使其处于感受态。目前主要采用电转化法和CaCl2法将外源DNA导入受体细胞中，并需要相应地制备电转化感受态细胞和CaCl2感受态细胞。 实验目的：学习感受态细胞的制备过程 实验材料：大肠杆菌菌株DH5a或DH10B 实验原理：电转化法是利用瞬间 ...

简单序列长度多态性（simple sequence length polymorphism，SSLP）是据串联重复排列微卫星基序两侧的单一序列设计引物，对微卫星序列（microsatellite DNA 或simple sequence repeats，SSR）进行扩增，由微卫星基序重复数目的变异而产生多态性。由于中某一特定的微卫星的侧翼序列通常都是保守性较强的单一序列，因而可以将微卫星侧翼的DN ...

在非理想的条件下，内切酶切割与识别位点相似但不完全相同的序列，这一现象称星号活性。有人提出，这种"星号"活性可能是内切酶的一种普遍特性（1），如果提供给相应反应条件，所有内切酶都会出现非特异性切割。NEB已证实下列酶存在星号活性：Apo I（2）、Ase I（2）、BamH I（3）、BssH II（2）、EcoR I（4）、EcoR V（5）、Hind III（1）、Hinf ...

Prepare: 200ml LB in a 1L flask 1L sterile ddH2O and place in cold room 4 50ml conicals chilled on ice 10% glycerol (cold) Chilled boxes of 100μl and 1ml pipet tips. Chilled 0.5ml tubes. General Th ...

1、 感受态细胞的概念 重组DNA分子体外构建完成后，必须导入特定的宿主（受体）细胞，使之无性繁殖并高效表达外源基因或直接改变其遗传性状，这个导入过程及操作统称为重组DNA分子的转化。 在原核生物中，转化是一个较普遍的现象，在细胞间转化是否发生，一方面取决于供体菌与受体菌两者在进化过程中的亲缘关系，另一方面还与受体菌是否处于一种感受状态有着很大的关系。 所谓的感受态，即指受体（或者 ...

一、目的 1.了解感受态细胞生理特性及制备条件，掌握大肠杆菌感受态细胞制备方法。 2.掌握质粒DNA 转化大肠杆菌的方法，了解转化的条件和利用半乳糖苷酶基因插入失活选择重组质粒DNA 的原理。 二、原理 （一）大肠杆菌感受态细胞制备的原理 所谓感受态，是指细菌生长过程中的某一阶段的培养物，只有某一生长阶段中的细菌才能作为转化的受体，能接受外源DNA而不将其降解的生理状态。感受态形成后，细胞生理状态 ...

DNA的克隆是指在体外将含有目的基因或其它有意义的DNA片段同能够自我复制的载体DNA连接，然后将其转入宿主细胞或受体生物进行表达或进一步研究的分子操作的过程，因此DNA克隆又称分子克隆，基因操作或重组DNA技术。DNA克隆涉及一系列的分子生物学技术，如目的DNA片段的获得、载体的选择、各种工具酶的选用、体外重组、导入宿主细胞技术和重组子筛选技术等等。 一 目的DNA片段的获得 DNA克隆的第一步 ...