DNA标记

（一）概述基因诊断是以核酸分子杂交技术为基础，在核酸水平检测人类遗传性疾病的基因缺陷和一些传染病病原体的方法。其基本过程是：制备探针，标记探针，检测样本。开展这项工作的关键是要得到高灵敏度、高特异性的探针。以往人们是用放射性同位素来标记探针。近年来，非同位素标记方法发展很快，已有取代同位素标记法的趋势。地高辛配基随机标记探针法，是较为成功的一种非同位素标记方法。其原理是：用化学方法把类固醇类半抗原 ...

This protocol describes a method for isolating DNA from plant tissue.Procedure1. Preheat the CTAB Isolation Buffer at 60°C.2. Grind 2 g of fresh leaf tissue to a powder in Liquid Nitrogen in a chilled ...

该法是Ｒ．Ｔreisman尚未发表的方法，同时也是Brinboim和Ｄoly(1979)及Ｉsh-Horowicz和Burke(1981)所用方法的改进。该方法对于目前使用的所有大肠菌菌株都卓有成效，并可与随后的纯化步骤，如聚乙二醇沉淀或氯化铯－溴化乙锭梯度平衡离心等，一并联合使用。注：括号中给出的体积可适用于未经氯霉素处理的培养。试验准备：1、 溶液Ｉ：50mmol/L葡萄糖25mmol/L ...

一、原理 细胞周期指细胞一个世代所经历的时间。从一次细胞分裂结束到下一次分裂结束为一个周期。细胞周期反应了细胞增殖速度。 单个细胞的周期测定可采用缩时摄影的方法，但它不能代表细胞群体的周期，故现多采用其他方法测群体周期。 测定细胞周期的方法很多，有同位素标记法、细胞计数法等，这里介绍一种利用BrdU渗入测定细胞周期的方法。 BrdU （5-溴脱氧尿嘧啶核苷）加入培养基后，可做为细胞DNA复制的原料 ...

本文主要介绍药理学研究、药物安全性评价试验、心血管疾病等临床各类疾病研究中实验动物的选择。

高分辨率熔解（High-resolution melting，简称HRM）分析是一门新兴的技术。它仅仅通过PCR之后的熔解曲线分析，就能检测PCR片段的微小序列差异，从而应用在突变扫描、序列配对和基因分型等多个方面。

从全血中提取DNA和RNA应该说是最基本的工作了，提取的DNA和RNA质量的好坏直接影响了下游的实验和分析，如何选择最适合的方法，成了很多人实验开始前最难以抉择的事情。

常用的基因转染技术是将外源基因导入靶细胞需要一定的载体和导入方法，基因转技术则是将纯化的含有靶基因的质粒DNA送入细胞内，并在细胞内表达。转染方法有多种，根据不同的细胞，贴壁或悬浮细所可选用不同的方法，其目的是要达到设置转染效率，影响转染产率的因素有多种，包括转染方法、操作技术、质粒 DNA的纯度、靶细胞的生长状态等。

DNA合成技术已成为分子生物学研究必不可少的手段，并且已在基因工程、临床诊断和治疗、法医学等各个领域中日益发挥重要的作用。

本文对肽核酸PNA原位杂交进行了简要的介绍。

本文简单介绍了一种胶回收的方法。

长度多态性是个体遗传特征在群体中的反映，对个体遗传标记的表型或基因型分型的技术方法分为限制性片段长度多态性（Restriction Fragment Length polymorphismRFLP）和扩增片段长度多态性（Amplification Fragment Length PolymorphismAmp~FLP）。 1.限制片段长度多态性 限制片段长度多态性（Restriction Frag ...

真核生物的DNA是以染色体的形式存在于细胞核内，因此，制备DNA的原则是既要将DNA与蛋白质、脂类和糖类等分离，又要保持DNA分子的完整。

SSR简单序列重复标记是由一类由几个核苷酸为重复单位组成的长达几十个核苷酸的重复序列，广泛分布在染色体上。由于重复单位的次数的不同或重复程度的不完全相同，造成了SSR长度的高度变异性，由此而产生SSR标记或SSLP标记。

本文介绍用二苯胺显色法测定DNA的含量。

染色体步移技术（genome walking）是一种重要的分子生物学研究技术，使用这种技术可以有效获取与已知序列相邻的未知序列。

系列一介绍的DNA斑点杂交的实验方法，本文举例介绍DNA斑点杂交技术在具体实验的运用方法。

斑点杂交（Dot blot）是将被检标本点到膜上，烘烤固定。一张膜上可同时检测多个样品，市售有多种多管吸印仪，样品加到孔中，在负压下就会流到膜上呈斑点状或狭缝状。反复冲洗进样孔，取出膜烤干或紫外线照射以固定标本，这时的膜就可以进行杂交。

分子杂交（molecular hybridization）指具有一定同源序列的两条核酸单链（DNA或RNA），在一定条件下按碱基互补配对原则经过退火处理，形成异质双链的过程。利用这一原理，就可以使用已知序列的单链核酸片段作为探针，去查找各种不同来源的基因组DNA分子中的同源基因或同源序列。

利用两条不同来源的多核苷酸链之间的互补性而使它们形成杂交体双链叫核酸杂交。与核酸杂交技术相对应的另一项技术被称为探针技术。将探针技术与分子杂交技术相结合，从而使分子杂交技术得以广泛推广应用。