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哺乳动物细胞基因/基因组编辑

基因编辑技术的飞速发展, 特别是近年来 CRISPR 技术的广泛应用,使得人类拥有了前所未有的改变和修饰基因组的能力。CRISPR 技术来源于细菌本身对抗噬菌体的「免疫系统」,这项技术利用单链引导 RNA(sgRNA) 和 Cas9 蛋白,可以在体内和体外简单、迅速、低成本实现基因编辑。利用 CRISPR 技术不仅可以对编码基因进行有效编辑和基因组的大规模筛选,而且还可以结合 NGS 对非编码 RNA(ncRNA)进行功能研究。CRISPR 技术已经广泛应用于全球各个 ...

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【求助】关于DNA双螺旋

soarmlxq 有个同学问我,DNA为什么是双螺旋的?它靠什么来形成双螺旋?我告诉他书上说是碱基堆积力。可是这么回答总觉得不够具体。碱基堆积力究竟是怎样的一种力呢?简单的碱基堆积力就能形成双螺旋结构吗?而且脱氧核苷酸本身也不是平面的,它立体的分子构造是不是也对它形成双螺旋结构有帮助呢?另外,如果存在满足以上条件的其他分子双链是否也会形成双螺旋结构?请各位高人帮忙给我一个更确切的答案!谢谢!nono1986 为什么是 ...

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【讨论】假基因到底有没有功能,

buding2008 最近做实验,想要个假基因,请问各位有没有做过它可以在什么 组织或者细胞上表达。大家畅所欲言,假基因到底表不表达,到底有没有功能。yuandong 有些有功能。waterbeijing 可能有功能,记得以前看过一篇文章说假基因的RNA跟可以编码的mRNA竞争miRNA本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你,都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号:shixiongcoming

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【求助】loxp/loxp

viola2010 您好,我是新手,pten (loxp/loxp)中loxp是什么意思?Fsp-cre中cre什么意思啊?谢谢woxingwosu 是基因敲除的一种手段。基本原理可见http://www.bio.davidson.edu/courses/genomics/method/CreLoxP.htmlviola2010 谢谢版主本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你,都可以成为师兄的好 ...

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【求助】关于启动子的序列界定

zxmgugl 最近在查某个基因的启动子区CpG岛,发现一个问题:在一个CpG finder的软件上,如果输入的是这个基因第一个外显子第一个碱基的上游序列,能反馈出一段CpG岛(虽然长度只有50多bp,这点也很奇怪,因为这个在线软件的CpG岛界定标准就是长度大于200bp);如果输入的是这个基因第一个外显子序列内第一个出现的ATG序列的上游序列的话,软件又分析出一段除了前面那个CpG岛,一段更长的CpG岛。所以,就有 ...

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【求助】请教illustrator gene是指何种基因?

liuhp2158 如题,阅读文献碰到illustrator gene,不得其解,请教,谢谢各位XDJM!woxingwosu 请提供一下上下文来参考一下~~liuhp2158 ....This relatively simple perturbation of the DNA methylation systemnot only mimicked the dietary effect of royal jelly on phenotypebut also changed the cytosine methyla ...

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【求助】报告基因

viola2010 您好,请问mice bearing a β-catenin-responsive lacZ reporter gene 是什么意思?如何构建?zhujoker 就是老鼠带有β-catenin反应的一个lacZ报告基因,检测β-catenin的变化viola2010 谢谢版主本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你,都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号:shixiongcoming

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【求助】基因的结构性和功能性表达。

吴彬彬 请问基因的结构性表达和功能性表达的具体定义分别是什么??求解答,谢谢!zhujoker 不知道你的这种名称从何得来,为什么需要一个具体的定义?为什么非要追求一个死死的地定义,而不理解其具体作用hongyang8318 你说的基因结构性表达可能是你翻译错了,应该说是基因的组成性表达(constitutive gene 或者constitutively expressed)。具体定义指:一类在任何情况下不经诱导均在细胞中有所表达 ...

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【求助】请教:关于mir-155靶基因的问题

mcstudent 我打算找mir-155的靶基因,在网站上是这样的,求高人指导:在http://www.mirbase.org/网站上输入file:///C:/Documents%20and%20Settings/Administrator/Application%20Data/Tencent/Users/270756706/QQ/WinTemp/RichOle/XQ0~4MD6R67KP$7R%7B%60~7E.jpg这时候我是不 ...

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【求助】一个基因在肿瘤细胞中表达下调,而对癌细胞用5‘Aza去甲基化处理后表达更下调。这该怎么解释?

sin_007 如题。一个基因在肿瘤细胞中表达下调,而对癌细胞用5‘Aza去甲基化处理后表达更下调。这该怎么解释?本来还怀疑该基因受表观遗传调控呢,但是结果相反,不知该怎么办了。特集思广益。sunquanqiu 可以再看看Histon啊sin_007 sunquanqiu wrote:可以再看看Histon啊恩,正在考虑要不要再做做乙酰化。但是目前还没有相关文献报道,所以还没放手做。本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的 ...

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【求助】终止密码突变的遗传病如何基因治疗

yin_xl 请教各位专家:对于终止密码突变,导致基因转录至下一个终止码才停止,这种突变引起的遗传性疾病,能否通过反义核苷酸特异性地结合在终止密码下游附近来强行终止翻译、以期产生正常的氨基酸序列?查了一下文献,没有看到资料。谢谢大家!zhujoker 这种技术在理论上现在是不行的,因为通过反义核苷酸会影响整个mRNA的稳定性,但是基因治疗是可以的yin_xl 谢谢!请问“用于基因治疗是可行的“这句话怎么去理解?是不是说通过载 ...

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【讨论】过氧化应激能帮助我们对抗癌症吗?

张振中 众所周知,端粒DNA是细胞分裂的“计数器”,随着细胞分裂次数的增加,端粒逐渐缩短,细胞走向凋亡。而端粒酶具有修复端粒DNA,延长端粒DNA长度的作用。在众多恶性肿瘤细胞中,端粒酶呈现高表达。然而有新的研究表明,在过氧化应激的条件下,端粒酶从细胞核中迁移出来并进入线粒体。端粒酶必须在细胞核中才能发挥修复端粒DNA的作用,所以端粒酶必然存在着某些尚未知晓的“细胞核外功能”。进一步的研究发现,线粒体损伤是人体衰老的重 ...

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【求助】可以在整体动物上沉默某个基因的表达吗?

linaque 本人没做过RNA干扰,想请教一个问题,可以在整体动物上沉默某个基因的表达吗?还是只能在细胞水平沉默某基因的表达?还是说在整体水平若要沉默某基因只能通过敲基因的方法?谢谢!路得自己走 基于过表达miRNA(当siRNA用了)的转基因小鼠敲减Prnp的实验,不知是否符合楼主所说的。linaque 谢谢!kinguangjun 个人观点:基因敲除一般是在胚胎细胞水平上筛选出来(也可以用多条透导型ShRNA表达系统整 ...

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【求助】如果知道某染色体的某一区域,如何知道改区域及附近编码了那些基因。

flster 如果知道某染色体的某一区域,如何知道改区域及附近编码了那些基因。如:X染色体上起始位置为72928764,终止区为 72965791的一段DNA都编码哪些基因该如何查?woxingwosu NCBI上有查基因组序列的呀,自己学习吧yake211 在 ucsc 网上查找,不过你先要搞清楚你的数据版本是 hg18 还是 hg19, 不同的版本物理位置有一定的变化。本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法 ...

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【求助】请问有没有TLRs基因敲除的小鼠

zaiju512 请问有没有人知道哪能买到所有TLRs敲除的小鼠或大鼠?zaiju512 想法有点天真呵呵hzyyy zaiju512 wrote:想法有点天真呵呵文献上有报道的!C3H/Hej小鼠,去上海斯莱克问一下吧!hzyyy 补充一下,C3H/Hej小鼠是TLR4抑制的小鼠,但所有TLR敲除的没法搞,因为老鼠几乎不会活,所以从这个角度讲,2楼的兄台还是有一定道理的!洄游的鱼 大鼠基因敲除研究才刚刚开始,肯定是没有的。前面几位说 ...

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【求助】矛盾的实验结果:IKb alpha和NFKB同时升高

吴佰霖 我的基因过表达,结合文献,推理应该是IKb alpha下降,而NFKB升高 (IKb可磷酸化NFKB,使后者降低)但现在我的结果是两者同时升高,请问可能的原因有哪些呢?谢谢woxingwosu 可否检测一下NFKB的磷酸化情况?erik NFKB是检测核内的吗?检测p65还是p50/吴佰霖 检测总蛋白,为P65本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你,都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号:sh ...

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【求助】请教:关于收缩环(Contractile ring)的内容

cdduanshui 收缩环:在有丝分裂后期中轴附近形成的激动蛋白质纤维环,负责将子代细胞分开。我也看来一些关于胞质分裂和F-actin的一些文献,但由初涉这一方面,有些英文也看得不是很明白,心里有个疑问请教各位老师;由actin形成的收缩环是不是有一面附着于细胞膜上,另一面连着myosin,然后由myosin提供动力把胞膜往里拉?麻烦老师解答下,谢谢cdduanshui 顶一下,希望老师们帮助woxingwosu Co ...

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【求助】外显子剪接沉默子怎么解释?

jiajiawonder 综述要用到这个 外显子剪接沉默子 可是不知道怎么能用简单明了的词解释清楚,求助高手~多谢~shilei5794749 Exonic splicing enhancer (ESE)An exonic splicing enhancer (ESE) is a DNA sequence motif consisting of 6 bases within an exon that directs, or enhances, accurate splicing of hetero-nuclear RNA (hnRNA) ...

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【求助】请教:RhoGEF和RhoA有没有什么关系的?RhoGEF到底是个什么东西

cdduanshui 请问各位老师:RhoGEF和RhoA有没有什么关系的?RhoGEF到底是个什么东西,也是小G蛋白的一种吗?只知道它叫RHO型鸟嘌呤核苷酸交换因子,刚刚接触这方面的东西,请老师点拨一下,不胜感激。cdduanshui 求教求教!cdduanshui 在顶一下,老师帮帮忙woxingwosu http://www.scitopics.com/Rho_GEFs.html本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的 ...

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【求助】分子机制研究方法

yixhchen 发现一个基因在某肿瘤细胞系中表达下调,下一步若做机制研究,可用哪些方法?新手,请各位高手多指点!yixhchen 没有人帮忙吗?提供一个方向就行了,不需太具体。woxingwosu 我来说说看:首先,确认是蛋白质水平的下调还是mRNA水平的下调,可以通过western blot和real time RT-PCR来初步确认一下。如果是mRNA水平上就出现下调,那么比较有可能的是这个基因是受这个癌肿瘤的某个信号通路或者是 ...

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