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抗体应用

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【交流】单抗讨论小组近期讨论计划

单抗讨论小组报名帖|\|/|单抗讨论小组日常讨论交流贴|\|/|\|/|单抗讨论小组工作交流与工资贴各位战友大家好!能够担任单抗讨论小组组长非常荣幸!!近期开始本人逐渐接触单抗小组的版务及相关事务,还请战友们多多支持和鼓励!!接触单抗的同行们都知道,单克隆抗体的制备是一个综合性非常强的技术,无论是病原微生物还是小分子药物的单抗,其制备过程中都需要有有机、无机化学、生化、分子生物学、基因工程、免疫学理论及技术、细胞融合及培养、E ...

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(共享)单克隆抗体技术

单克隆抗体技术抗原提纯与动物免疫对抗原的要求是纯度越高越好,尤其是初次免疫所用的抗原。如为细胞抗原,可取1×107个细胞作腹腔免疫。可溶性抗原需加完全福氏佐剂并经充分乳化,如为聚丙烯酰胺电泳纯化的抗原,可将抗原所在的电泳条带切下,研磨后直接用以动物免疫。  选择与所用骨髓瘤细胞同源的BALB/c健康小鼠,鼠龄在8~12周,雌雄不限。为避免小鼠反应而不佳或免疫过程中死亡,可同时免疫3~4只小鼠。  免疫过程和方法与多克隆抗血清 ...

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【共享】如何检测GFP、GFP、YFP、EYFP、CFP抗体?

检测GFP、EGFP、YFP、EYFP、CFP的GFP抗体GFP是绿色萤光蛋白(Green Fluorescent Protein)的简称,由238个氨基酸残基组成。GFP蛋白质最早是由下村脩等人在1962年在一种学名Aequorea victoria的水母中发现。其基因所产生的蛋白质,在蓝色波长范围的光线激发下,会发出绿色萤光。GFP或其突变体EGFP标签系统等被广泛用于基因表达效率的检测,以及和目的蛋白融合表达用于检 ...

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(交流)SELEX技术(Systematic Evolution of Ligands by Exponential Enrichment)

请规范发贴,否则删贴,谢谢合作。抗体是机体免疫系统中最重要的效应分子,具有结合抗原、结合补体、中和毒素、介导细胞毒、促进吞噬和通过胎盘等功能,发挥抗感染、抗肿瘤、免疫调节与监视等作用。抗体的研究始于18世纪末,即1890年德国学者Von Behring证明免疫动物血清中存在抗毒素(抗体)。随后又相继发现了凝集素、沉淀素、溶血素、溶菌素和补体结合素等。随着DNA结合蛋白研究的深入,受组合化学、抗体库和随机噬菌体肽库技术的启发 ...

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Monoclonal Antibody Production Protocol

(1)Cell Fusion and SelectionSolutions:-IMDM-IMDM complete + 15% MCM.-PBS-PEG 50% ( w/v ): PEG 4000 ( 50% ) from Boehringer Manheim 1 243 268-Aminopterin: Sigma, A 5159 (50X )Prepare a T-150 flask with 170ml of IMDM complete with MCM instead of PCM (= IMDM - m ), and keep it in the incubator for fused cells.Isolation of ...

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【共享】抗体保存指南

抗体保存得当与否,直接决定了抗体的活性和使用效果!如果抗体保存得当,大部分抗体活性都可以维持数月甚至数年。本指南以 abcam 抗体保存方法为主,同样也可以应用到其他绝大部分公司的抗体产品!请谨记!无论何时请按照说明书推荐的保存条件正确保存抗体!1、 收到抗体后请务必在 12000rpm 离心 1-5分钟后再打开管盖进行分装和保存!Abcam 的抗体使用非常特殊的储存管,只有在12000rpm离心1-5分钟才能将附着在管壁或盖内的抗体全 ...

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【请教】关于胶体金诊断试剂的一篇阅读理解

做个小测验,看看下面您从下面文章中能得到什么?(仅涉及技术及操作方面)几年前的春天,我移民来到温哥华。同年夏天来到一家生物技术公司工作。在国内作了多年_究员的我,在这家公司的职位是技术员。刚进入实验室没几天,我就发现这个实验室的管理不够规范。举几个例子:实验室的工作人员配少量缓冲液时使用方瓶而不是使用带刻度的量筒。由于大家都那么做,量筒的需求就不大。这样一来,要想找到配液必用的量筒,倒不那么容易了。更使我惊讶的是胶 ...

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(请教)抗体的选择

请教前辈,我要做westernblot及免疫组化,抗原是人源性的PEDF,实验动物是大鼠,以下有两种santa cruz公司的抗体,source及specificity的说明不同,请问我选用哪一种更为适合,两者有何区别阿?谢谢指教!!!!SOURCEPEDF (H-125) is a rabbit polyclonal antibody raised against a recombinant protein corresponding to amino acids 281-4 ...

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溶血空斑形成试验

溶血空斑形成试验是一种体外检测单个抗体形成细胞(浆细胞)的方法,故又称体外抗体形成细胞(Plaque Forming Cell, PFC)测定技术。此项技术不仅可以作为免疫基本理论研究的有力工具,广泛地用于检测产生IgM类型(包括其它各类免疫球蛋白及其亚类)的抗体形成细胞,它还可作为临床筛选抗肿瘤新药以及研究中药对抗体免疫功能影响的免疫学指标。一、原理:  溶血空斑形成试验的基本原理是将经绵羊红细胞免疫小鼠的脾细胞与一定量的绵羊 ...

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[共享] 抗体保存和操作

Antibody Storage and Handling (Hevner Lab)1. General principlesa. Antibodies are precious resources and must be conserved—i.e., use as little as possible, do not waste, and keep cold.b. Antibodies are proteins and should be kept cold (refrigerated, on ice, or frozen) when not in use.c. The more dilu ...

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【共享】进口内参抗体——在WB实验中为什么需要使用内参抗体?

进口内参抗体——在WB实验中为什么需要使用内参抗体?要检测一个基因的表达产物是否正确,或者比较表达产物量的相对变化,首选方法是Western Blot。虽然,顺利的时候Western Blot做起来很简单,可不顺的时候也很令人心烦――做不出结果啦、假阳性啦、结果出现多条带啦、到底是一抗有问题还是二抗有问题啦……毕竟,作为一种有活性的生物大分子,抗体和抗原的反应毕竟不象1+1那么明确,而用这种不确定的试剂来测定同样知之甚少的 ...

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(共享)载脂蛋白抗体的制备

载脂蛋白抗体的制备  抗原免疫动物产生的抗体是血清γ-球蛋白的一部分。抗体的理化性质及结构与γ-球蛋白相近似。γ-球蛋白是一组结构相似,但又有差异的蛋白质,通称为免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig),按其结构和免疫化学性质的差异,又可分为五类,分别称为IgG、IgA、IgM、IgD和IgE。载脂蛋白抗体以IgG最为稳定。因载脂蛋白的体液中含量不同以及分离纯化的难易的差别,可分别采用多克隆抗体制备法和单克隆抗体 ...

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【共享】有关抗体的保存

不同类型抗体的保存指南, 用以避免抗体污染或损伤请不时核查数据表以获取特定保存建议。如果恰当保存和处理, 大多数抗体应能保持活性数月乃至数年。保存温度和条件对于很多抗体而言, 分装成小等份并冻存于 -20℃ 或-80℃ 是最佳保存条件。分装成小等份可最大程度减少由冻融造成的损伤, 以及从单个试剂瓶中多次吸取而引入的污染。小等份只需冻融一次, 如有剩余, 可将剩余物保存于 4℃。在收到抗体时,在 10,000 × g 下离心20 秒以沉积截留于试剂瓶螺纹的溶液, 并以小等份转移至 ...

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(简介)免疫毒素和基因工程抗体

免疫毒素是近年来新兴的一种肿瘤导向治疗方法。它利用抗肿瘤单抗与肿瘤细胞的特异性结合,将生物毒蛋白与抗体偶联,去定向攻击肿瘤细胞,而其对正常组织的杀伤较小,故被形象地称为“生物导弹”。免疫毒素由“弹头”和“载体”以一定的连接方法偶联而成。其“弹头”部分即生物毒蛋白,来自植物或微生物,为酶催化型毒素,效率很高,理论上一个分子进入胞浆即能杀死细胞。理想的毒素载体应具有与肿瘤细胞特异与“弹头”偶联后不影响彼此活性。目前,单克隆抗 ...

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【丁香园/丁香通 第一期品牌抗体库发布】想找品牌抗体?汇聚Abnova、Abcam、CST、santacruze一线品牌抗体库数据,一站让你查到底!

多少个香港铜锣湾,才够满足我的潮流控;多少个抗体网站,才够帮我找到品牌抗体?上丁香通(www.biomart.cn),一站帮你搞定!继丁香通ATCC细胞库发布之后两个月,丁香通第一期品牌抗体库正式发布。本次抗体库收集了Abnova、Abcam、CST、santacruze四个一线品牌的抗体库数据,并且可以通过“适用物种”、“应用范围”、“抗体来源”、“是否单克隆”等维度进行深入搜索,以下为使用示意流程。1、输入关键词,比如搜索“ ...

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ELISA技术中的抗原与抗体的反应

1.2.1 抗体的结构抗体是能与抗原特异性结合的免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)。Ig分五类,即IgG、IgA、IgM、IgD和IgE。与免疫测定有关的Ig主要为IgG和IgM。Ig由两个轻链(L)和两个重链(H)的单体组成。Ig的轻链是相同的,有κ(kappa)和λ(Lambda)两种型别。五类Ig的重链结构不同,这决定了它们的抗原性也不同。IgG和IgM的重链分别称为γ(gamma)链和μ(mu)链。重链和轻链 ...

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B淋巴细胞膜表面免疫球蛋白(SmIg)的检查 直接免疫荧光法

一、实验原理SmIg是B细胞的抗原识别受体,也是B细胞特异的表面标志,用直接免疫荧光法可检查出SmIg。用荧光素标记的抗Ig抗体,在一定条件下与淋巴细胞混合,荧光素标记的抗Ig抗体可以与B细胞表面的Ig结合,在荧光显微镜下观察可见B细胞膜上出现荧光。此方法可用来鉴定B淋巴细胞。二、实验材料1. ICR小鼠(北京大学医学部实验动物中心提供)2. 异硫氰酸荧光素(FITC)标记的兔抗小鼠Ig抗体(购自BD公司)3. Hank's液: ...

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购买抗体及试剂盒的一些体会

近日为实验购买流式细胞术的抗体已经大鼠干扰素-γ的试剂盒,费了不少时间和精力,现将在购买过程中的一些体会总结一下,以供像我一样刚入实验室,难寻帮助的新手一些参考:1. 首先得明确要测的指标,以及测这些指标的方法,并去比较哪种方法在自己的实验条件下可行性好,最好又是最经济的。因为每个指标可能都有几种不同的方法,所以了解并去比较各种方法,可以让自己的实验方案更优化。这就要求去检索相关的文献,去了解这些方法。相应的原理基本 ...

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Production and Use of Nonradioactive Hybridization Probes

Molecular hybridization is a useful technique for identifying specific target sequences even when they are present as a single copy in a complex population. It can be performed either on a solid matrix on which pure DNA (or RNA) is bound (blot hybridization) or on tissue sections (in situ hybridiza ...

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Chromosomal Mapping of Genes by Nonisotopic In Situ Hybridization

With the advent of nonradioactive labels, in situ hybridization (ISH) has become a useful technique for the detection of viral DNA in infected tissue (1), mRNA expression (2), sex determination (3), human gene mapping (4), and interphase cytogenetics (5–8). For chromosomal mapping of genes by ISH, ...

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