MaterialsCytokine-specific Primary Antibodiesunlabeled or biotinylated antigen-affinity purified polyclonal antibodies (R&D Systems ''AF'' or ''BAF'' series) or selected monoclonal antibodies. Seconda ...
Procedure:1) Fix tissues for 3 hr on ice in 4 formaldehyde (2.5 ml of Polysciences #18814 made up to 10 ml in 80 mM NaPO4 pH 6.8 containing 0.2 gm of sucrose). Wash for 2 hr in several changes of c ...
Objective:Bgal staining allows identification of embryonic tissues/cells expressing lacZ marker protein by development of pigmented (blue) product in the presence of lacZ enzymatic activity. Procedure ...
Objective:Immunohistochemistry allows visualization of antigens (usually proteins) within an embryo. Typically a primary antibody binds specifically to an antigen (e.g. Luciferase); then a secondary a ...
Dechorionate directly on apple juice/agar plates with 50-60 chlorox; embryos will float to the surface after 2-3''. Collect embryos on a Millipore device with a nitex filter; rinse well with 0.1 Trito ...
Fix embryos in formalin or MEMFA for one hour at room temperature with mixing. Rinse with TBS replace with methanol store at -20oC. Rehydrate by slowly adding TBS over a ten minute period. Once sample ...
凝胶浓度与蛋白质分离范围凝胶浓度% (W/V)最适分离范围(KD)7.570-20010.050-15012.030-10015.012-4520.04-30不同浓度分离胶的制备(两块胶)组分7.5%10%12%15%20%Tris-HCL缓冲液3.75ml3.75_ml3.75_ml3.75_ml3.75_ml蒸馏水7.28 ml6.03 ml4.95 ml3.45 ml1.0ml丙烯酰胺溶液 ...
凝胶浓度与蛋白质分离范围凝胶浓度% (W/V)最适分离范围(KD)7.570-20010.050-15012.030-10015.012-4520.04-30不同浓度分离胶的制备(两块胶)组分7.5%10%12%15%20%Tris-HCL缓冲液3.75ml3.75_ml3.75_ml3.75_ml3.75_ml蒸馏水7.28 ml6.03 ml4.95 ml3.45 ml1.0ml丙烯酰胺溶液 ...
一,免疫组织化学简介免疫组织化学又称免疫细胞化学,是指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应,对相应炕原进行定性、定位、定量测定的一项新技术。它把免疫反应的特异性、组织化学的可见性巧妙地结合起来,借助显微镜(包括荧光显微镜、电子显微镜)的显像和放大作用,在细胞、亚细胞水平检测各种抗原物质(如蛋白质、多肽、酶、激素、病原体以及受体等)。二,免疫组化技术的基本原理 ...
一,免疫组织化学简介免疫组织化学又称免疫细胞化学,是指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应,对相应炕原进行定性、定位、定量测定的一项新技术。它把免疫反应的特异性、组织化学的可见性巧妙地结合起来,借助显微镜(包括荧光显微镜、电子显微镜)的显像和放大作用,在细胞、亚细胞水平检测各种抗原物质(如蛋白质、多肽、酶、激素、病原体以及受体等)。二,免疫组化技术的基本原理 ...
Jackson Immunoresearch公司二抗推荐的其产品保存方法l 对于未标记的抗体如单克隆抗体IgG部分,从正常血清中纯化的蛋白,Gamma球蛋白:物理状态:无菌过滤的液体保存:无菌条件下保存在2-8°C,每天准备新鲜的工作液。l 对于正常血清,抗血清,过氧化物酶抗过氧化物酶免疫复合物物理状态:冻干粉重溶和保存:冻干粉保存在2-8°C,准备用时,根据指 ...
免疫荧光三标?――蓝色荧光的AMCA与Dylight 405标记二抗做免疫荧光实验中,经常要进行免疫荧光的双标记实验,也就是在同一个样本上同时进行两种蛋白的免疫荧光检测。具体的实验时,可以选择不同来源的一抗,然后再选择分别针对一抗的二抗,同时二抗上标记有不同的荧光团。一般的双标记实验里,都会选择一个绿色的(如FITC、Cy2、Dylight 488等)荧光标记,一个红色的(如Rhodamin、Cy ...
荧光二抗的选择――Dylight荧光与传统荧光标记的比较顾名思义,荧光二抗通常指代的就是带荧光团标记的二抗,这样的二抗可以通过观察其在不同波长下荧光的强度来确定其二抗的含量。常见的荧光团包括FITC、Rhodamine、Texas Red、PE、Cy系列等。比如FITC即异硫酸荧光素,是目前应用最广泛的荧光素。最大吸收光波长为490~495nm,最大发射光波长为 520~530nm,呈现明亮的黄 ...
荧光二抗如何选择更好-根据一抗种属及类型二抗广义上是指专门和一抗进行特异性反应和结合的抗体,在免疫学反应中,经常需要针对试验选择不同的二抗,艾美捷能为您的科研工作提供最适合和最全面的二抗产品。检测任何目的靶蛋白都有不止一种抗体可供选择,同时在后继试验中也会有不同的检测方案,因此在选择二抗的时候要综合考虑一抗的类型及后继检测方案的要求,一般来说,选择合适的二抗需要从下面几个方面考虑:【一抗的种属来源 ...
在WB实验中为什么需要使用内参抗体?进口内参抗体――在WB实验中为什么需要使用内参抗体? 要检测一个基因的表达产物是否正确,或者比较表达产物量的相对变化,首选方法是Western Blot。虽然,顺利的时候Western Blot做起来很简单,可不顺的时候也很令人心烦��做不出结果啦、假阳性啦、结果出现多条带啦、到底是一抗有问题还是二抗有问题啦……毕竟,作为一种有活性的生物大分子,抗体和抗 ...
在免疫沉淀IP&免疫荧光IF如何正确的选择Flag标签抗体?Flag标签系统是已被公认的用于表达、纯化以及检测融合蛋白的表达系统,广泛应用于Western blotting、免疫细胞组化、免疫共沉淀、流式细胞术、蛋白纯化以及蛋白相互作用、蛋白分离等多个研究领域。Flag标签是一个与重组蛋白相融合的由8个亲水氨基酸(Asp-Tyr-Lys-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys)组成的多肽片断。FL ...
有适合免疫沉淀IP的GST抗体吗?近年来在原核表达体系中,谷胱甘肽S转移酶GST表达纯化系统的应用更为普遍,它的来源是日本血吸虫的25kDa大小的GST蛋白。GST标签系统具有蛋白表达产率高、表达产物纯化方便,以及利于GST抗体制备等特点和优势。GST融合蛋白在水溶液中可溶,可从细菌裂解液中提取,在不变性的条件下通过亲和层析得到。GST融合蛋白可被位点特异性蛋白酶裂解,从而除去GST蛋白。正是由于 ...
INTRODUCTION The enzyme-linked immunospot (ELISPOT) assay measures the secretion intensity of effector molecules released by immune cells in response to ex vivo antigenic stimulation as well as the fr ...
INTRODUCTION The enzyme-linked immunospot (ELISPOT) assay measures the secretion intensity of effector molecules released by immune cells in response to ex vivo antigenic stimulation as well as the fr ...
INTRODUCTION The formidable size and structure of polytene chromosomes allow mapping of chromosomal protein distributions at very high resolution. This protocol describes the preparation of polytene c ...