抗原设计

无菌干燥玻璃容器从屠宰场取回猪血。盛取猪血前玻璃容器中加入无菌生理盐水50ml，庆大霉素8万单位。猪血取回后4℃冰箱静置数小时，待血清析出，回收上清，4000rpm离心15分钟，回收上清，送培养中心用正压过滤器0.22μm滤膜过滤除菌，将血清分装（100ml/瓶）置于-20℃冰箱保存备用。 (责任编辑：大汉昆仑王) ...

一、为什么要用同型对照？同 型对照是使用与一抗相同种属来源、相同亚型、相同剂量和相同的免疫球蛋白及亚型的免疫球蛋白，用于消除由于抗体非特异性与细胞结合而产生的背景染色。同型 对照是真正意思上的阴性对照，它不但可以用来设定流式细胞仪的电压，而且还可以帮忙省去昂贵与繁琐的重组细胞因子竞争封闭步骤。在流式细胞仪上样前，染色方式如下：样本管：一抗＋样本，同型对照管：同型对照＋样本二、如何选择同型对照？( ...

由于在流式细胞实验过程中，荧光抗体对单细胞悬液的标记效果直接影响实验的数据质量。因此，需要考虑各种影响流式抗体品质及检测效果的因素，例如抗体特异性、荧光素信号强弱、荧光素标记方式、同型对照等。 流式抗体的选择： 1. 流式抗体本身也是抗体，所以选择流式抗体一定要满足抗体选择最基本的条件：目标蛋白特异性，反应种属以及应用实验。 2. 流式抗体荧光标记的方式包括直接标记和间接标记两种。在流式实验过 ...

1、Q：rh Annexin V R-PE 20 tests是BD公司用于凋亡流式检测的试剂盒，产品显示种属为人，请问能否用于大鼠细胞的检测？ A：可以。因为Annexin V是与PS亲和，而PS在不同种属间应该没差异。在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸（PS）只分布在细胞膜脂质双层的内侧，而在细胞凋亡早期，细胞膜中的磷脂酰丝氨酸（PS）由脂膜内侧翻向外侧。Annexin V是一种分子量为35~36kD的 ...

1、流式细胞仪上的FL2-W FL2-A FL2-H 分别是做什么的？ FL2-W是只检测荧光的脉冲宽度， FL2-H是指脉冲高度。通常在做细胞周期分析时应用，用于去除粘连细胞。 2、流式同型对照怎样选择？ 同型对照（Isotype Control）：使用与一抗相同种属来源、相同亚型、相同剂量和相同的免疫球蛋白及亚型的免疫球蛋白，用于消除由于抗体非特异性结合到细胞表面而产生的背景染色。如果一抗是多 ...

1、Q：要做胃粘膜组织的DNA含量及倍体检查，但取材后要等几个星期才会做流式细胞术检查，请问：胃组织要怎样保存好呢？用低温保存，还是用乙醇固定？或者固定后再低温下保存？ A：我做过乳腺细胞的DNA含量测定，取得组织以后，先处理成单细胞悬液，然后再加70%冰乙醇固定，要保证冰乙醇的最终浓度为50%，这样固定的细胞悬液可以至少保存12小时，最多可保存一个月，上机检测前再加PI综合染液。我就是这样做的， ...

由于在流式细胞实验过程中，荧光抗体对单细胞悬液的标记效果直接影响实验的数据质量。因此，需要考虑各种影响流式抗体品质及检测效果的因素，例如抗体特异性、荧光素信号强弱、荧光素标记方式、同型对照等。流式抗体的选择：1 流式抗体本身也是抗体，所以选择流式抗体一定要满足抗体选择最基本的条件：目标蛋白特异性，反应种属以及应用实验。2 流式抗体荧光标记的方式包括直接标记和间接标记两种。在流式实验过程中，尽量减少 ...

PVDF膜与硝酸纤维素膜的比较： PVDF膜的材质是由 Millipore 公司在1985年首创并应用于蛋白转印。由于PVDF膜与硝酸纤维素膜相比有许多突出的优点，包括更好的蛋白质保留率、更高的机械强度和更广的化学相容性(Pluskal et al. 1986)，因此被广泛使用于免疫检测实验当中。其中更高的机械强度和更优的化学相容性使PVDF膜成为免疫检测中染色和二次免疫检测时的理想 ...

一、如何搭配流式抗体荧光标记流式抗体荧光标记搭配主要由3个因素决定的：流式细胞仪能检测多少个通道、需要同时检测检测多少个指标、厂家的抗体有多少种荧光标记。如果流式细胞仪的通道越多，那么同一份样本能同时做的表面/胞内标志就越多A、 如何根据流式细胞仪搭配流式抗体1） BD流式细胞仪（06版目录第614页）流式细胞仪能检测多少个通道是由有多少根激光决定的以及每根激光的功能决定的，所以首先需要注意两点： ...

1． 细胞经胰酶消化，1000rpm 10minPBS洗2遍。2． PBS重悬细胞，分装至EP(1ul/管)，2000转 6min 离心，弃上清，拍散细胞，加1ul抗体/管(塑料小瓶包装)，10ul抗体/管（大玻璃瓶包装）。注意：加完抗体的管子要马上盖盖，避免混淆。3． 4℃避光孵育30min各管加1mlPBS 2000转 6min 离心，重复2遍。4． ...

诊断试剂临床质量评价要点从临床应用角度考核检验试剂的可靠性，是以其能否区分健康与疾病的能力作为依据的。目前还很难找到 100%可靠的试验，任何试验都会出现假阳性或假阴性。判断试验的可靠性常以其灵敏度及特异性作为考核标准。临床应用的灵敏度用疾病患者试验阳性的百分率表示，特异性以无病者试验阴性的百分率表示。进行这种评价，首先需要收集有关的病人血清，然后用公认的检测该项标志物最可靠的试剂进行测定，以确定 ...

一、标本的收集和保存　　用于ELISA测定的临床标本最为常用的是血清。　　（1）要注意避免出现严重溶血。血红蛋白中含有血红素基团，其有类似过氧化物的活性，因此，在以HRP为标记酶的ELISA测定中，如血清标本中血红蛋白浓度较高，则其就很容易在温育过程中吸附于固相，从而与后面加入的HRP底物反应显色。　　（2）样本的采集及血清分离中要注意尽量避免细菌污染，一则细菌的生长，其所分泌的一些酶可能会对抗原 ...

在流式细胞仪分析中用到的“荧光补偿”这个术语是指修正荧光渗漏的过程如从探测器除去除匹配荧光以外的任何荧光信号。荧光补偿过程从原理上来说相对简单，但实际上涉及许多精细、敏感的方面从而使在实践操作相当复杂。 非常不幸，荧光补偿操作可能是在流式操作中的数据采集和分析等步骤中最少被了解和掌握的内容，可能是因为在介绍它时经常要用到线性代数来计算，并且还要求了解它的产生原理。然而，正确的荧光补偿 ...

1．取材组织块，经固定后，常规石蜡包埋，4μm切片。2．切片常规用二甲苯脱蜡，经各级乙醇至水洗：二甲苯（I）5min→二甲苯（Ⅱ）5min→100％乙醇2min→95％的乙醇1min→80％乙醇1min→75％乙醇1min→蒸馏水洗2min。3．苏木素染色5min，自来水冲洗。4．盐酸乙醇分化30s（提插数下）。5．自来水浸泡15m ...

改良多聚－L－赖氨酸防脱片载玻片的制备徐婷　（海门市人民医院，226007） 鄂群_钟声旺 邱冬梅（南通大学）摘要 目的：通过改良载玻片洗洁法防脱片处理并与传统防脱片法和市售成品防脱片进行比较，探索一种经济实用效果良好的防脱片载玻片的制备方法；方法：将市售普通载玻片进行改良防脱片载玻片的制备处理和传统重铬酸钾洗涤法及防脱片制备处理后，与市售防脱片载玻片成品进行相同的临床病理组织学切片制备 ...

一、常用的多聚赖氨酸包被可以用三蒸水，或者PBS，浓度一般为用0.1 mg/ml进行包被。二、其他常用包被方法比较(以各种免疫分析为例)：49456826.snap三、我配成1mg/ml的储存液，用Mini-Q(超纯水)配制，放在－20℃储存，使用时稀释10倍（也用超纯水），即终浓度100ug/ml，过滤后使用。工作液过滤使用，如一次用不完，放在4℃储存。多聚赖氨酸在水溶液中易分解，所以一次不要配 ...

66) 如果我用sephadex G-25脱盐，如何选择缓冲液？因为我认为，如果选择含盐的缓冲液，本身带入了盐，能起到脱盐的效果吗？如果选择含盐的缓冲液，缓冲液里含有的盐会最后流出来吗？另外，分子筛有没有载量的问题？缓冲液选择看你需要什么缓冲液就选择什么没有什么特别的要求.你的缓冲液当然是没有盐的否则那何必除盐呢.含盐缓冲液当然不能去掉盐了它只能把你样品中的盐去除用的原理是蛋白在柱子中走得比盐要快 ...

DAB是否有效，可通过DAB直接与二抗反应，若不显色，则是DAB有问题或是二抗有问题， 是否DAB失效或是二抗浓度太低，可更换DAB或提高二抗浓度。排除这两者原因，再摸索最佳条件。首先要弄明白，所谓的DAB染色是怎样来的，DAB和过氧化氢是HRP的底物，可以说有三个环节1：DAB是否在有效期，和是否被稀释，后者就要求片子要擦干，甩干，这样才能保证DAB的有效浓度。2：如果不是用DAB试剂盒，一定要 ...

1．固定：最好用4%的多聚甲醛固定液。对于冰冻切片，甲醛固定有时比冰冻丙酮好；但对于不同的组织和抗原，可选用不同的固定液。有时候商品化的抗体会有比较适合而推荐的固定液，请于购置前注意说明书。 Bouin S固定液：饱和苦味酸750ml，甲醛250ml，冰醋酸50ml，其对组织的穿透力较强，固定较好，结构完整，但因偏酸，对抗原有一定损害，且组织收缩明显，不适于组织标本的长期保存。 PL ...

（1）DAB显色时间不是固定的，主要由显微镜下控制显色时间，到出现浅棕色本底时即可冲洗；（2）DAB显色时间很短（如几秒或几十秒）就出现很深的棕褐色，这很可能说明你的抗体浓度过高或抗体孵育时间过长，需要下调抗体浓度或缩短你的抗 体孵育时间；（3）此外，若很短时间就出现背景很深，还有可能你前面的封闭非特异性蛋白不全，需要延长封闭时间；（4）DAB显色时间很长（如超过十几分钟）才出现阳性染色，一方面可 ...