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抗原设计

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抗体与免疫球蛋白有什么不同?

抗体与免疫球蛋白有什么不同?生物科技发展在中国整个科技史都处于落后状态,近年来,国家科技迅猛发展,取的了可喜的成绩,过去有很长一段时间有人用电泳证明血清中抗体活性在γ球蛋白部分,故曾把抗体统称为两种(γ)球蛋白。后来发现,抗体并不都在γ区;并且位于γ区的球蛋白,也不一定都具有抗体活性。   1964年,世界卫生组织举行专门会议,将具有抗体活性以及与抗 ...

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检测收集标本的成份是否足够稳定

收集标本前必须清楚要检测的成份是否足够稳定。对收集后当天进行检测的标本,储存在4℃备用,如有特殊原因需要周期收集标本,将标本及时分装后放在-20℃或-70℃条件下保存。避免反复冻融。标本2-8℃可保存48小时,-20℃可保存1个月。-70度可保存6个月。部分激素类标本需添加抑肽酶。液体类标本: 标本必须为液体,不含沉淀。包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等。1ml的全血可 ...

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阴性结果常见原因

① 确认是否忽略了应该加的某种试剂,包括一抗、二抗、三抗及底物等。② 确认所有的试剂是否按正确的顺序滴加,是否孵育了足够的时间。③ 对照抗体的标签确认是否使用了正确的抗体,以及所用的检测系统是否和一抗匹配。如,一抗是兔来源,一定要用抗兔的二抗来匹配;或一抗是羊来源,必须用抗羊的二抗来匹配。④ 检查抗体所使用的稀释度及稀释溶液是否正确。一抗的稀释液不能用来稀释二抗。⑤ 检查抗体的有效期和保存条件,尤 ...

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常见的免疫检测六大技术

(一)免疫酶染色试验 (immunoenzyme staining test,IEST) 免疫酶染色试验以含寄生虫病原的组织切片、印片或培养物涂片为固相抗原,当其与待测标本中的特异性抗体结合后,可再与酶标记的第二抗体反应形成酶标记免疫复合物,后者可与酶的相应底物作用而出现肉眼或光镜下可见的呈色反应。(二)皮内试验 (intrader rpmal testID) 宿主在病原体刺激后,体内产生亲细胞性 ...

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ELISA检测结果准确可靠的必要条件

优质的试剂,良好的仪器和正确的操作是保证ELISA检测结果准确可靠的必要条件。ELISA的操作因固相载体的形成不同而有所差异,国内医学检验一般均用板式点。本文将叙述板式ELISA各个操作步骤的注意要点,珠式、管式及磁性球ELSIA,国外试剂均与特殊仪器配合应用,严格遵照规定操作,必能得出准确的结果。  可用作ELISA测定的标本十分广泛,体液(如血清)、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液、粪便)等均可 ...

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如何用流式区分G2期和M期?

有丝分裂细胞周期各时相的DNA 含量不同通常正常细胞的G1/ G0 期具有二倍体细胞的DNA 含量(2N) ,而G2/ M 期具有四倍体细胞的DNA 含量(4N) ,而S 期的DNA含量介于二倍体和四倍体之间。因此,用DNA染料处理细胞后,可以将细胞周期各时相区分为G1/ G0 期S 期和G2/ M 期并可通过计算获得各时相的百分率。M期是细胞周期的重要研究对象,但由于G2期和M期的DNA含量一 ...

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抗体的稀释度稀释液及稀释度的测定方法

抗体的稀释度包括特异性抗体,中间抗体及标记抗体。任何一种免疫组化方法要想得到令人满意的染色效果,必须将抗体进行最佳稀释。一般来说,抗体的稀释度取决于下列因素。 (一)抗体的浓度(亦称滴度) 每毫升溶液内所含抗体分子越多,滴度就越高,该抗体可高度稀释,尤其是特异性一抗的稀释度。一般商品化抗体只知道每毫升含多少抗体蛋白量,不知道所含抗体分子。自己制备抗体可通过琼脂糖双扩散或放射免疫法进 ...

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抗子宫内膜抗体(endomethal antibody,EMAb)检测

子宫内膜抗体(endomethal antibody,EMAb)是子宫内膜异位病患者受到异位内膜的刺激,或经血逆流等因素导致免疫应答紊乱产生的一种自身抗体,并与子宫内膜中靶抗原结合,在补体参与下,引起子宫内膜免疫病理损伤,影响孕卵着床,也容易发生早期流产。目前检测EMAb的方法有间接免疫荧光法(1FT)、双向免疫扩散法(1D)、间接血凝法(PHA)及ELISA法等。IFF法需刮取子宫内膜制备抗原片 ...

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α2巨球蛋白(α2M) 的测定

α2巨球蛋白(α2-macroslobulin,α2M)是血清中有重要生物学活性的大分子糖蛋白,分子量725kD。主要由肝脏合成,骨骼肌也能合成,半寿期约10d。α2M是一种广谱蛋白酶抑制剂,可与多种肽链内切酶形成不可逆性复合物,是纤溶酶的主要抑制物,在维持出、凝血平衡上具有重要作用。它除具有抗放射损伤作用外,尚可参与免疫调控。业已证实,&alpha ...

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PCR检测血中HBV DNA是判断乙肝最可靠的方法

血中HBV DNA的存在是HBV感染最为直接,最为灵敏和最为特异的指标。HBV DNA检测方法目前在国内使用最广的是聚合酶链反应(PCR)。使用PCR检测血中HBV DNA,其临床诊疗价值主要有:1.急性HBV感染的诊断。当机体感染HBV时,在外周血中HBVDNA的出现要早于其他血清学抗原抗体指标,并且只有HBVDNA存在才会引起感染,因此使用极为灵敏特异的PCR方法检测HBVDNA可为急性HBV ...

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荧光抗体的保存方法

以0-4℃或-20℃低温保存,防止抗体活性降低和蛋白变性。最好加入浓度为1:(5000-10000)的硫柳汞或1:(1000-5000)的叠氮化钠防腐,小量分装,如0.1-1目录,真空干燥后更易长期保存。 (责任编辑:大汉昆仑王) ...

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抗体稀释液的配制

Antibody Dilution BuffersPrimary Antibody Dilution Buffer: 1%BSA (stabilizer and blocking) 0.1% cold fish skin gelatin (blocking) 0.05% sodium azide (preservative) 0.01M PBS ...

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抗核抗体(anti-nucleic antibody,ANA)检测

抗核抗体(anti-nucleic antibody,ANA)是以真核细胞的核成分为靶抗原的自身抗体的总称。细胞核内含有许多不同成分如核蛋白、核糖核蛋白(ribonucleo protein,RNP)、脱氧核糖核酸(DNA)等。在某些因素,如细菌、病毒、药物等作用下,可改变细胞核某些成分的性质,激发机体免疫系统产生许多抗不同核成分的抗体。这些抗核抗体目前尚无统一命名,有些是以第一个检出该抗体的患者 ...

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甲状腺过氧化物酶TPO的检测方法

甲状腺过氧化物酶(thyroidperoxidase,TPO)是甲状腺微粒体(TM)的主要有效抗原活性成分,分子量为84~105kD,基因重组TPO为933个氨基酸的多肽链。鉴于以往使用的粗提TM抗原中混杂有其他抗原成分,在测定自身免疫性甲状腺炎病人血清中抗-TM时,可能出现少数假阳性,为使结果更为可靠,目前国外已将抗-TPO代替抗-TM抗体检测,而且大多数文献已将抗-TM抗体改名为抗-TPO抗体 ...

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超声波快速石蜡制片法

临床活检,用常规石蜡制片法制作,病理报告如没特殊情况,一般都需要三天才能发出。其程序基本是活检当天下午取材,晚上组织脱水及浸蜡,第二天上午包埋切片及染色,当切片送达医生手里时,已是第二天的上午,下午看阅切片,至复检医生手里时,已是第三天的时间了。这是一般的工作时间,可这对于急需获得病理结果的患者来说,三天时间确实太长,尤其是门诊病人,远道求医的患者,或者外地甚至国外的患者,三天的时间就意味着等待 ...

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烘烤切片-常规石蜡切片制作

切片的烘烤看似简单,只在烘烤箱或干燥箱一放,让其烘烤就行了,但从某种意义上讲,它也是一个关键,如果切片烘烤不好,到染色的时候,便会使切片脱离载玻片(掉片),使整个过程毁于一旦,因此,认真烤好切片是制好切片的前提。怎样才能使切片烘烤得好呢?我们的做法如下:当切片裱于载玻片后,于烘烤箱边竖立起来,控干水份,然后平放于烘烤箱的烤板上烘烤,温度可调至70℃。当最后一个蜡块切完后,前面的切片也烤得差不多了。 ...

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二抗应用实例分析

为分析二抗的使用情况,我们随机抽取了100篇2007年或2008年发表于Science 或 Journal of Biological Chemistry杂志上的文章(英文),这些文章涵盖了来自于16个国家的约80个研究机构。收集的数据显示二抗的使用非常广泛,可以应用到几乎所有类型的免疫检测中,尤其是Western blot、免疫组织化学和免疫细胞化学。事实上,二抗在ELISA及流式细胞术中应用也 ...

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免疫磁珠法分离细胞原理

免疫磁珠法分离细胞原理:免疫磁珠法分离细胞是基于细胞表面抗原能与连接有磁珠的特异性单抗相结合,在外加磁场中,通过抗体与磁珠相连的细胞被吸附而滞留在磁场中,无该种表面抗原的细胞由于不能与连接着磁珠的特异性单抗结合而没有磁性,不在磁场中停留,从而使细胞得以分离。免疫磁珠法分为阳性分离法和阴性分离法:阳性分离法-磁珠结合的细胞就是所要分离获得的细胞阴性分离法-磁珠结合不需要的细胞,游离于磁场的细胞为所需 ...

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高免血清及卵黄抗体的制备技术

免疫血清  1.动物的选择 可作为免疫用的动物多为哺乳类和禽类,主要有家兔、绵羊、马、猪、驴、豚鼠和鸡等,其中实验常用家兔、绵羊、鸡和豚鼠。选择动物时要注意以下几个方面:  a.抗原与动物种系 动物性抗原的免疫原性,随动物种系远近而有差别。近缘动物的蛋白质免疫原性弱,反之则强。因此选择动物时应选用亲缘关系较远的动物。  b.免疫血清的用量 所需要的免疫血清,如是经常大量地使用,选择免疫动物时则应选 ...

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血清总甲状腺素(TT4)测定

血清中99.95%以上的T4与蛋白结合,其中80%~90%与球蛋白结合称为甲状腺素结合球蛋白(简称TBG)。TT4是指T4与蛋白结合的总量,受TBG等结合蛋白量和结合力变化的影响,TBG又受妊娠、雌激素、病毒性肝炎等因素影响而升高,受雄激素、低蛋白血症(严重肝病、肾病综合征)、泼尼松等影响而下降,在临床上必需注意。血清TT4测定方法有放射免疫法(RIA)、酶标免疫法(EIA)和竞争性蛋白结合法( ...

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