抗原设计

流式细胞分析（Flow cytometry，FCM）是以高能量激光照射高速流动状态下被荧光色素染色的单细胞或微粒，测量其产生的散射光和发射荧光的强度，从而对细胞（或微粒）的物理、生理、生化、免疫、遗传、分子生物学性状及功能状态等进行定性或定量检测的一种现代细胞分析技术，它具有如下几个特点：①标本只要是单细胞即可用于分析，如血液、骨髓、体液中的细胞、培养细胞等，实体组织只要经处理后制成单细胞悬液也能 ...

酶联免疫吸附实验材料，试剂，溶液 1．酶标板，100μltip头，1ml Ep管，湿盒2．包被稀释液（0.05mol/L碳酸钠-碳酸氢钠bufferpH 9.6）碳酸钠0.15g碳酸氢钠0.29g叠氮钠0.02g加双蒸水至100ml调至pH 9.63.封闭液(5%小牛血清/PBS溶液) 小牛血清5ml undefinedPBS(pH 7.4)95ml4.洗涤液(PBST pH ...

1 . 取材 取材的好坏，直接影响切片的质量。医生在取材时，首先要有一把锋利的取材刀，在切割组织时要避免取材刀来回拖拉，切取的组织块厚薄要均匀，一般厚度以0.2 ～0.3cm为适，较容易发脆的组织如甲状腺、肝脏、血块、淋巴结、大块癌组织等可适当厚一点，而脂肪组织、肺组织、纤维性肿瘤、平滑肌瘤等致密的或试剂不易渗入的组织应取薄一些；淋巴结应修掉两侧球冠，并尽量剔除周围的脂肪组织。在取材中还应十 ...

Western，也称Western blot、Western blotting、Western印迹，是用抗体检测蛋白的重要方法之一。Western可以参考如下步骤进行操作。 1.收集蛋白样品(Protein sample preparation) Ø 可以使用适当的裂解液，例如碧云天生产的Western及IP细胞裂解液(P0013)、RIPA裂解液等，裂解贴壁细胞、悬浮细胞或组织 样品。对于某些特 ...

1．抗原的处理与小鼠腹水粗抗体的收集现在以B亚基的抗体制备为例说明：取2mg的蛋白，溶于100µl的10％SDS中，加入等体积的上样缓冲液，沸水浴3min，进行SDS－PAGE。将胶的两边缘切带染色，脱色后在相应的位置从分离胶上切下未染色目的蛋白带，无菌水洗涤，用匀浆器匀浆后，再在2～5mM的PBS中透析5h以上，冷干。将冷干的样品用500～800µl 的2mM～5mM的PBS溶解（得到体积约60 ...

由于免疫组织化学技术具有特异性强、灵敏度高及能将形态研究与功能、代谢研究有机地结合在一起的显著特点，所以，这门新技术从一诞生起就显示出了强大的生命力和广阔的应用前景。此方法经不断改进和发展已日趋成熟，应用范围逐渐扩大。目前已有近十种技术方法及几百种标记抗体，技术方法逐步规范化，标记抗体逐步商品化，现今它已被广泛地应用于生物学和医学研究的许多领域，取得了令人瞩目的成就。一、免疫组织化学技术的原理和应 ...

摘要目的］以环氧合酶2为例，具体介绍本实验室常用的免疫印迹法，并明确实验操作中应注重的细节。［方法］总蛋白抽提及定量、SDSPAGE、半干转印、特异性抗体结合及ECL检测。［结果］采用本法操作简便，有很好的重复性，本实验室多次成功运用于COX2蛋白的检测。［结论］此法在本实验室多次运用，可靠、重复性强，明细实验操作细节更有利于初学者顺利地开展实验，值得应用与推广。关键词环氧合酶免疫印迹法免疫 ...

检测细胞因子对阐明机体免疫应答及其调节机制、免疫相关疾病的发生、发展规律和知道临床治疗均具有重要意义。细胞因子的检测主要分为免疫学、生物学和分子生物学三种检测方法。免疫学方法主要采用双位点ELISA法定量检测细胞因子，分子生物学方法主要检测细胞因子mRNA表达水平。本部分只介绍生物学方法检测细胞因子活性，其原理是根据细胞因子对特定的依赖性细胞株（即靶细胞）的促增殖作用，以增殖细胞中的DNA合成或酶 ...

凝血酶原是由肝脏合成的依赖维生素K的凝血因子。异常凝血酶原(Abnormal ProthrombinAPT)和凝血酶原的化学结构极其相似，区别在于：APT分子氨基端的特定位置上的谷氨酸残基未经羧基化，因而缺乏结合钙离子的结构基础，在一般凝血试验中无凝血活性。自从1984年Liebman等观察到原发性肝癌患者血浆APT水平显著升高，APT与肝癌的关系受到关注，其临床应用价值受到重视，测定方法不断改进 ...

一、找到一个“CT Gene Datebases”：http://www.cancerimmunity.org/CTdatabase/CTinfo.php?CTid=NY-ESO-1，在“Protein Information”中选择“SwissProt”进入：http://www.expasy.org/cgi-bin/niceprot.pl?P78358，找到NY-ESO-1全长氨基酸序列为：M ...

促进抗体产生的抗原辅助剂。 又称非特异性免疫增生剂。本身不具抗原性但同抗原一起或预先注射到机体内能增强免疫原性（见抗原）或改变免疫反应类型。 种类很多，目前尚无统一的分类方法，常用的佐剂可分为4类：无机佐剂，如氢氧化铝，明矾等；有机佐剂，微生物及其产物如分枝杆菌（结核杆菌、卡介苗）、短小杆菌、百日咳杆菌、内毒素、细菌提取物（胞壁酰二肽）等；合成佐剂，如人工合成的双链多聚核苷酸（双链多聚腺苷酸、尿苷 ...

ELISA试验以灵敏度较高、特异性较好的特点在临床上得到了广泛的应用，但操作中的各个环节对试验的检测效果影响较大，如不注意，有可能导致显色不全、花板等结果。现将操作中各个环节常出现问题的原因及解决办法总结于下，以期给同行带来一些启发，提高试验质量。 ...

间接法（测抗体） 双抗体夹心法（测抗原） 竞争法（测抗原） 抑制性测定法 1 包被抗原：用包被缓冲液稀释抗原至最适浓度（5～20μg/ml ...

基本原理　　经固定的凋亡细胞其染色体荧光染料的DNA可染性性下降。细胞一经固定就不再是活细胞，而且细胞固定过程对细胞膜的通透性也有影响。因此发展了用“细胞活性”鉴定染料染色的流式细胞仪检测方法。这些方法细胞不经固定就直接用DNA染料染色，且染料的浓度要比固定细胞所用的浓度要低得多。流式细胞仪通常根据细胞膜完整性将细胞分为“活细胞”和“死细胞”，因此正常细胞和凋亡细胞归为活细胞。活细胞染料如Hoec ...

流式细胞仪血小板分析应用范围通过分析信号传递、细胞骨架结构、颗粒释放、糖蛋白构形、膜磷脂、与抗凝因子的结合和微粒形成，分析血小板活化，血小板对刺激物的反应性 通过分析受激后表面结合蛋白触发凝血链式反应和表面糖蛋白缺陷检测，分析血小板止血功能的获得性和遗传性缺陷 结合血小板大小，检测血小板RNA含量，分析血小板成熟度，计数网织血小板 发现血小板抗体，做定性和定量分析 血小板分析的临床应用血小板活化 ...

流式细胞计的基本结构流式细胞计主要由四部分组成。它们是：流动室和液流系统；激光源和光学系统；光电管和检测系统；计算机和分析系统。　　（1）流动室和液流系统：流动室由样品管、鞘液管和喷嘴等组成，常用光学玻璃、石英等透明、稳定的材料制作。设计和制作均很精细，是液流系统的心脏。样品管贮放样品，单个细胞悬液在液流压力作用下从样品管射出；鞘液由鞘液管从四周流向喷孔，包围在样品外周后从喷嘴射出。为了保证液流是 ...

一、如何搭配流式抗体荧光标记流式抗体荧光标记搭配主要由3个因素决定的：流式细胞仪能检测多少个通道需要同时检测检测多少个指标厂家的抗体有多少种荧光标记如果流式细胞仪的通道越多，那么同一份样本能同时做的表面/胞内标志就越多A、 如何根据流式细胞仪搭配流式抗体1） BD流式细胞仪（06版目录第614页）BD流式试剂选择及应用的相关问答与简介流式细胞仪能检测多少个通道是由有多少根激光决定的以及每根激光的 ...

Blotting总结（Western、Southern、Northern、Eastern、Southwestern blotting、Far-Western blotting ）印迹（blotting）是生物学实验中常用的检测和分析方法。印迹（blotting）实验的过程可以简单描述为将待检测的生物大分子经电泳等方法分离后转移并固定在膜（如：硝酸纤维素膜、PVDF膜、尼龙膜）上，然后用特异性识别物 ...

应用Western Blotting的方法检测血清中某种蛋白的含量是最关键的问题是要将血清做怎样的电泳前处理.一般的处理方式:1. 常规分离血清即取血后常温放置使其凝固然后3000 rpm 15 min离心取上清即可。2. 测血清蛋白浓度。3. 用Laemmli buffer（蛋白裂解液）稀释至所需浓度，我一般为5ug/ul.4. 加入适量loading buff ...

一．配胶注意一定要将玻璃板洗净，最后用ddH2O冲洗，将与胶接触的一面向下倾斜置于干净的纸巾晾干。分离胶及浓缩胶均可事先配好（除AP及TEMED外），过滤后作为储存液避光存放于4℃，可至少存放1个月，临用前取出室温平衡（否则凝胶过程产生的热量会使低温时溶解于储存液中的气体析出而导致气泡，有条件者可真空抽吸3分钟），加入10%AP（0.7~0.8:100 分离胶浓度越高AP浓度越低，15%的分离胶可 ...