相关专题 一、原理 人和多种动物红细胞与白细胞一样,也具有重要的免疫功能。其基础是红细胞表面具有C3b受体(C3bR)。红细胞可通过其表面的C3bR,发挥清除免疫复合物(IC)、促进吞噬、提呈抗原及激活补体等多种作用。因此,建立的检测红细胞免疫功能的各种方法,也多以红细胞表面的C3bR为基础设计的。现已建立的主要有红细胞C3bR花环及IC ...
相关专题 一﹑原理 溶血空斑试验是体外检测单个抗体形成细胞(B淋巴细胞)的一种方法,即将经绵羊红细胞(SRBC)免疫过的家兔淋巴结或小鼠脾脏制成细胞悬液,与一定量的SRBC结合,于37℃作用下,免疫活性淋巴细胞能释放出溶血素,在补体的参与下,使抗体形成细胞周围的SRBC溶解,从而在每一个抗体形成细胞周围,形成肉眼可见的溶血空斑。每个空斑表 ...
相关专题 一、实验原理 细胞凋亡或称程序性细胞死亡(Programmed Cell Death)是细胞的生命现象之一,它在机体的胚胎发育、组织修复及自身反应性T淋巴细胞的清除等方面起着十分重要的作用。细胞凋亡调节的失控可导致临床各种疾病的发生。如老年性痴呆与神经细胞凋亡过度有关,自身免疫性疾病和肿瘤与细胞凋亡的抑制有关。细胞凋亡有别于细胞坏死 ...
相关专题 【原理】 在含有特异抗体的琼脂板中打孔,并在孔中加入定量的抗原,当抗原向周围扩散后与琼脂中抗体相结合,既形成白色沉淀环,其直径或面积与抗原浓度呈正相关。同时用标准抗原或国际参考蛋白制成标准曲线,即可用以定量检测未知标本的抗原浓度(mg/ml或IU/ml)。 应用这一实验方法可检测正常人群或患者血清中IgG、IgA及Ig ...
相关专题 基因芯片技术在生命科学史上具有开拓性的意义,曾跻身年度自然科学领域10大进展之一,组织芯片是基因芯片的延伸,自诞生以来就获得了生命科学从业人员的热切关注。本文从组织芯片的制备方法、应用领域、以及目前的发展概况做简要的介绍。 组织芯片的制备技术: 制备组织芯片的两个关键步骤是制备受体蜡块和从供体石蜡块中精确采集微量样品。虽然至今仍然 ...
相关专题 (一) 原理 免疫电镜技术是免疫化学技术与电镜技术结合的产物,是在超微结构水平研究和观察抗原、抗体结合定位的一种方法学。它主要分为两大类:一类是免疫凝集电镜技术,即采用抗原抗体凝集反应后,再经负染色直接在电镜下观察;另一类则是免疫电镜定位技术。该项技术是利用带有特殊标记的抗体与相应抗原相结合,在电子显微镜下观察,由于标准物形成一定 ...
相关专题 1.纯度高、含杂蛋白少用IgG优于血清抗体,用Fab优于IgG。 2.特异性强 即抗IgG与IgG在免疫电泳上只有一条沉淀线与IgG的全血清也只有一条沉淀线这才算是特异性的单价抗体。 3.效价高 一般琼脂扩散鉴定为1︰64以上才算合格。 ...
相关专题 (一)脾细胞 1.材料 (1) 免疫过的血清抗体滴度高的Balb/c鼠。 (2)1640培养液 (3)2.5%FCS-1640营养液 2.操作方法 (1) 拉颈或用CO2处死小白鼠。 (2将小鼠放于70%酒精中浸泡消毒,取出固定于板上,在无菌条件下取脾。 (3)把脾放入5ml含有2.5%FCS的1640液中,冰浴下轻轻洗去脾上的红 ...
相关专题 (一)动物的选择 目前应用最广的是小白鼠和大白鼠,尤以小白鼠为好。就品系而言以Balb/c小白鼠应用最广,因为所有的小白鼠骨髓瘤系均从Balb/c小白鼠系诱导出来。Balb/c系小白鼠必须用纯系的,雌雄均可,以8~12周龄为宜。 大白鼠也可,能产生较多量的单克隆抗体。现在已经在小鼠杂交瘤的基础上,发展了小鼠-大鼠,小鼠-人以及人- ...
相关专题 细胞介导的免疫反应(cell mediated immune CMI)在机体抗感染及抗肿瘤免疫、移植排斥反应和自身免疫病中发挥重要的作用。CMI的主要效应细胞之一为细胞毒T淋细胞(cytotoxic T lymphocyteCTL)。目前在医学基础与临床研究中重视CTL活性测定,将其作为了解机体细胞免疫功能和探索疾病机理的重要方法 ...
相关专题 生物帮之抗体制备 腹水:腹水重组后可加入少量叠氮纳等来阻止细菌生长。腹水应当冻存。单抗最好能够小包装保存以避免反复冻融。若要保存较长时间,则不要在4℃。和血清不同,腹水中含有蛋白酶,会使抗体效价下降,因此加入蛋白酶抑制剂可以选择。 纯IgG:不要稀释抗体后来保存,除非加入羊血清,BSA等后。IgG会和玻璃,塑料等粘附。当IgG的浓 ...
相关专题 一、蛋白质SDS-PAGE电泳 1、安装垂直板电泳装置 用洗洁精、清水和无水乙醇清洗两块玻璃板,晾干后安装。 2、制备SDS-聚丙烯酰胺凝胶 (1)配制9%分离胶(15ml):双蒸水6.55ml,1.5M Tris-HCl(pH8.8)3.75ml,30%丙烯酰胺储存液(Acry/Bis)4.5ml,10%SDS 150ml,1 ...
相关专题 一 原理: IP是利用抗原蛋白质和抗体的特异性结合以及细菌蛋白质的“prorein A"特异性地结合到免疫球蛋白的FC片段的现象活用开发出来的方法。目前多用精制的prorein A预先结合固化在argarose的beads上,使之与含有抗原的溶液及抗体反应后,beads上的prorein A就能吸附抗原达到精制的目的。 实验最需要 ...
相关专题 如何实现完美的免疫组化实验 (一)、ABC法:(注,下面各种方法,均为手工操作,如没特别说明,均在室温下进行) 1.切片经二甲苯Ⅰ 5分钟。 2.切片经二甲苯Ⅱ 5分钟。 3. 无水酒精Ⅰ 30秒。 4. 无水酒精Ⅱ 30秒。 5. 95%酒精Ⅰ 30秒。 6. 95%酒精Ⅱ 30秒。 7. 90%酒精 30秒。 8.80%酒精 3 ...
相关专题 多姿多彩的琼脂 可溶性抗原与相应抗体在半固体琼脂凝胶内扩散,二者相遇,在比例合适处形成白色沉淀。基本类型有单向扩散和双向扩散两种。 (一)双向琼脂扩散试验(Double immunodiffusion test) 抗原和抗体加到琼脂板上相对应的孔中,两者各自向四周扩散,如两者相对应,浓度比例合适,则经一定时间后,在抗原、抗体孔之间出 ...
相关专题 多姿多彩的琼脂 原理 一种定量试验,将一定量的抗体混合于琼脂内,倾注于玻片上,凝固后,在琼脂层上打孔,再将抗原加入孔中,使其向四周扩散。抗原抗体复合物形成的沉淀环直径与抗原的浓度成正比。如事先用不同浓度的标准抗原制成标准曲线,则未知标本中的抗原含量即可从标准曲线中求出。本试验主要用于检查标本中各种免疫球蛋白和血清IgG含量。 材料 ...
相关专题 多姿多彩的琼脂 又称圆筒平板法(cylinder plate method)。用于测定抗生素效价的生物学定量方法之一。标准的方法是以20毫升的琼胶培养基放入陪替氏培养皿内做成平面,上面加上预先培养的试验标准菌种,例如掺入了葡萄球菌的琼胶4毫升,而使之凝固,上面再放上一个外径8毫米的不锈钢圆筒,筒内倒满青霉素稀释液之后,在35—37℃ ...
相关专题 多姿多彩的琼脂 可溶性抗原与相应抗体持异性结合,两者比例适当并有电解质存在及一定的温度条件下,经一定的时间,可形成肉眼可见的沉淀物,称为沉淀反应 (precipitation ) 。沉淀反应的抗原可以是多糖、蛋白质、类脂等。与相应的抗体相比,抗原分子小 ( 琼脂扩散( agar diffusion )为可溶性抗原与抗体在琼脂凝胶中 ...
相关专题 ELISA免疫实验技术 以已知抗体(抗HBs)包被载体,然后将含有抗原的待检标本加入,共同孵育后,抗原结合于包被抗体上,再加入酶标记特异抗体(酶标抗HBs),酶标抗体连接到抗原上,最后加入底物溶液,根据颜色反应来判定抗原含量。 【材料】HBSAg试剂盒,本试剂盒含: 1、包被抗-HBs反应条 1瓶 2、酶结合物 1瓶 3、HBSA ...
相关专题 ELISA免疫实验技术 1. ELISA的原理 ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性,酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性。在测定时,受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液 ...