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抗原设计

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HLA分型技术回顾

相关专题 主要组织相容性复合物(MHC)是脊椎动物体内最复杂且具有高度多态性的基因群。1984年George Snell 首次发现小鼠MHC即H-2,1958年Dausset 发现了人的MHC即HLA基因。MHC的表达产物称为主要组织相容性抗原,MHC抗原是有核细胞表面膜蛋白分子,对抗原递呈和免疫信号传递起关键作用。 HLA基因,位 ...

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抗体的提取与纯化

相关专题   精制免疫球蛋白的方法很多。一般采用综合技术,避免蛋白变性。如分离IgG时,多结合使用盐析法与离子交换法,以求纯化。提取IgM的方法也很多,如应用凝胶过滤与制备电泳法,或离子交换与凝胶过滤等。   一、盐析法   取x ml血清加x ml生理盐水,于搅拌下逐滴加入2x ml饱和硫酸铵,硫酸铵的终饱和度为50%。   ↓4℃,3h以 ...

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抗体的制备原理与方法

相关专题 抗体的制备方法与原理 一、抗血清的制备   有了质量好的抗原,还必须选择适当的免疫途径,才能产生质量好(特异性强和效价高)的抗体。   (一)用于免疫的动物   作免疫用的动物有哺乳类和禽类,主要为羊、马、家兔、猴、猪、豚鼠、鸡等,实验室常用者为家兔、山羊和豚鼠等。动物种类的选择主要根据抗原的生物学特性和所要获得抗血清数量,如一般 ...

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免疫细胞化学与图像分析

相关专题   在细胞生物学中,一个常见的问题是如何获取与细胞功能相关的各种定量测量信息。在免疫细胞化学中也存在同样的问题。制作免疫细胞化学标本环节 较多,只要有一个环节 失误就会影响实验结果,除了需要精制的药品外,还需要熟练的技术。那么,做成了理想的标本后,如何进行观察,才能获得尽量多的的各种定量信息,而且使这些信息能较客观的反映出来,这就是 ...

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免疫胶体金技术(Immune colloidal gold technique)

相关专题 (一) 原理 免疫胶体金技术是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗体的一种新型的免疫标记技术。胶体金是由氯金酸(HAuCl4)在还原剂如白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸等作用下,聚合成为特定大小的金颗粒,并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态,称为胶体金。胶体金在弱碱环境下带负电荷,可与蛋白质分子的正电荷基团形成牢固的结合,由于这种结 ...

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免疫荧光细胞化学的原理

相关专题   免疫荧光细胞化学是根据抗原抗体反应的原理,先将已知的抗原或抗体标记上荧光素制成荧光标记物,再用这种荧光抗体(或抗原)作为分子探针检查细胞或组织内的相应抗原(或抗体)。 在细胞或组织中形成的抗原抗体复合物上含有荧光素,利用荧光显微镜观察标本,荧光素受激发光的照射而发出明亮的荧光(黄绿色或桔红色),可以看见荧光所在的细胞或组织 ...

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有关细胞和组织学技术

相关专题 一、细胞和组织  免疫组织化学技术是用标记物或显色物标记的抗体检测细胞和组织内的抗原,从而达到诊断和研究疾病的目的。抗原的准确显示和定位与制备的细胞和组织标本质量的好坏有着密切的联系。由于各种抗原的生化、物理性质不同,如温度高低、酸碱度强弱及各种化学试剂的作用均可影响抗原的免疫学活性,良好的细胞和组织学结构将有助于抗原的准确定位。因 ...

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免疫细胞化学在神经科学中的应用

相关专题   免疫细胞化学的发展对许多领域的研究起到很大的推动作用,在神经科学的研究中尤为突出。本章 仅就免疫细胞化学在神经科学的基础研究方面的应用做一简要介绍。  一、确定神经递质的性质、定性和分布  早期的神经科学工作者应用传统的神经解剖学研究方法如甲基蓝染色法、镀银染色法等对中枢及外周神经系统的结构做了大量的研究工作,但由于技术方法的限 ...

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Cellular ELISA Protocol

相关专题 Formalin Fixed Cell Plates 1.Trypsinize confluent flasks2. Pool and count cells3.Centrifuge at 1500 rpm for 10 minutes4.Resuspend to the appropriate concentration in c ...

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Competitive ELISA

相关专题 DAY 1 1. Coat Nunc immuno-module plates overnight in usual manner. 2. Set up competition assay between antibody and competing substance :- Prepare a 1:2 serial dilutio ...

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免疫酶细胞化学

相关专题   免疫酶细胞化学是免疫细胞化学(ImmunocytochemistryICC)中最常用的方法之一,它是在抗原抗体特异反应存在的前提条件下,借助于酶细胞化学的手段,检测某种物质(抗原/抗体)在组织细胞内存在部位的一门新技术:即预先将抗体与酶连结,再使其与组织内特异抗原反应,经细胞化学染色后,于光镜或电子显微镜下观察分析的形态学研究方 ...

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常用免疫组织化学染色方法

相关专题 (一)、ABC法:(注,下面各种方法,均为手工操作,如没特别说明,均在室温下进行) 1.切片经二甲苯Ⅰ 5分钟。 2.切片经二甲苯Ⅱ 5分钟。 3. 无水酒精Ⅰ 30秒。 4. 无水酒精Ⅱ 30秒。 5. 95%酒精Ⅰ 30秒。 6. 95%酒精Ⅱ 30秒。 7. 90%酒精 30秒。 8.80%酒精 30秒。 9. 70%酒精 3 ...

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免疫组织化学的定义

相关专题 (一)什么叫免疫组织化学?简单地说,用已知的抗原或者抗体去检测待检组织中的抗原或抗体,根据其结合后经一系列方法的处理,呈色反应,在光镜下确定组织的来源属性和部位。目前免疫组织化学作为病理诊断,鉴别特殊病例,是不可缺少的最重要的手段,国内在免疫组织化学的应用方面已经普遍地展开并扩展至基层单位,为病理事业做出应有的贡献。 抗原(抗原,A ...

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单克隆抗体细胞的选择

相关专题 (一)脾细胞 1.材料(1) 免疫过的血清抗体滴度高的Balb/c鼠。(2)1640培养液(3)2.5%FCS-1640营养液2.操作方法(1) 拉颈或用CO2处死小白鼠。(2将小鼠放于70%酒精中浸泡消毒,取出固定于板上,在无菌条件下取脾。(3)把脾放入5ml含有2.5%FCS的1640液中,冰浴下轻轻洗去脾上的红血球。( ...

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免疫组织化学技术的发展概况

相关专题 (一) 免疫荧光细胞化学技术 1941年,浣熊等建立了免疫荧光细胞化学技术,它的原理是根据抗原抗体反应的规律,把已知的抗原或抗体标记上荧光素,制成荧光抗原或抗体,然后以它作为探针来检测组织或细胞内的相应物质。应用的方法有直接法、间接法、夹心法和补体法等。在荧光显微镜下,根据其形成复合物所发的荧光,来确定判断检测物的来源、性质和部位。 ...

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一种提高单克隆抗体产量的简易方法

相关专题 近年来单克隆抗体已广泛应用于基础理论与临床应用研究[1]。如何制备质量好产量高的单克隆抗体是当前各有关实验室研究的重要问题,通常用于生产单克隆抗体的方法有两种:①利用纯系小鼠生产免疫腹水,该法的优点是产量和效价高,但纯化困难,价格昂贵,生产周期长;②杂交瘤细胞常规体外培养法,此法虽然产量不高效价低,但不含正常小鼠免疫球蛋白,较易纯化 ...

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单克隆抗体时动物的选择与免疫

相关专题 (一)动物的选择 目前应用最广的是小白鼠和大白鼠,尤以小白鼠为好。就品系而言以Balb/c小白鼠应用最广,因为所有的小白鼠骨髓瘤系均从Balb/c小白鼠系诱导出来。Balb/c系小白鼠必须用纯系的,雌雄均可,以8~12周龄为宜。 大白鼠也可,能产生较多量的单克隆抗体。现在已经在小鼠杂交瘤的基础上,发展了小鼠-大鼠,小鼠- ...

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杂交瘤细胞的保存方法

相关专题 (一)保存 当获得产生所需的单克隆抗体的杂交瘤细胞后,必须将一部分杂交瘤细胞保存,否则在连续传代的过程中,可能产生突变或染色体的漂移以至丧失固有特性或丢失产生抗体的特性。另外在长期的培养过程中,难免不发生污染以至于毁灭。所以必须冷藏保存一部分。保存方法如下:1.材料(1) 细胞:取对数生长期的细胞。(2) 10%二甲基亚砜保护液(二 ...

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ELISA [酶联免疫吸附试验]原理与分类

相关专题 ELISA免疫实验技术 1. ELISA 的原理 ELISA 的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性,酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性。在测定时,受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与 ...

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兔抗人血清抗体的制备和效价测定

相关专题 实验原理凡能刺激机体产生抗体,并能与抗体发生特异性结合的物质称为抗原。物质所具有的这种特性称为抗原性(Antigenicity)。当机体受抗原刺激后,在体液中出现的一种能与相应抗原发生反应的球蛋白,称免疫球蛋白(Immunoglobulin Ig)。含有免疫球蛋白的血清称免疫血清。医学上常见的抗原物质,种类很多,如病原微生物及其代谢 ...

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