常用免疫组织化学染色方法

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(一)、ABC法：(注，下面各种方法，均为手工操作，如没特别说明，均在室温下进行)
1.切片经二甲苯Ⅰ 5分钟。
2.切片经二甲苯Ⅱ 5分钟。
3. 无水酒精Ⅰ 30秒。
4. 无水酒精Ⅱ 30秒。
5. 95%酒精Ⅰ 30秒。
6. 95%酒精Ⅱ 30秒。
7. 90%酒精 30秒。
8.80%酒精 30秒。
9. 70%酒精 30秒。
10.自来水洗。(后面的切片脱蜡至水一般都是1-10)
11.0.3%H2O2甲醇处理切片10-20分钟。
12.水洗。
13.抗原 修复。
14.PBS 洗3次，1分钟/次。
15.加入血清孵育20分钟。
16.摔干血清，加入一抗60分钟。
17.PBS洗3次，2分钟/次。
18.加入二抗孵育30分钟。
19.PBS洗3次，2分钟/次。
20.加入ABC复合物，孵育30分钟。
21. PBS洗3次，2分钟/次。
22.DAB-H2O2孵育切片5-10分钟。
23.PBS洗，水洗。
24.Harris苏木素染核5-10分钟。
25.水洗，分化，蓝化，脱水，透明并封固。
(二)、LSAB法。(SP法)(Labelled streptavidim biotln)
1.切片脱蜡至水。
2.0.3%H2O2甲醇处理切片10-20分钟。
3.水洗。
4.抗原修复。
5.PBS洗3次，1分钟/次。
6.加入血清孵育10分钟。
7.摔去血清，加入一抗孵育30-60分钟。
8.PBS洗3次，每次2分钟。加入二抗，孵育20分钟。
9.PBS洗3次，每次2分钟。
10.加入SP复合物孵育20-30分钟。
11.PBS洗3次，每次2分钟。
12.DAB-H2O2孵育5-10分钟。
13.PBS洗，水洗。
14.Harris苏木素染核5-10分钟。
15.水洗，分化 ，蓝化，脱水，透明并封固。