蛋白提取

进口胎牛血清提取制备酶的经典方法，多采用硫酸铵分级沉淀，胰酶在 75% 饱和度硫酸铵中沉淀，其它杂蛋白一般在 10% 硫酸铵饱和度下被沉淀而除去。经此多次提取，后在 PH8.0peng 酸缓冲液中得到结晶。本实验拟通过从猪胰脏中制备胰酶结晶实验，掌握酶的制备、一般分离、提取、纯化和结晶的操作技术。同时为亲和层析、免疫学实验准备实验样品。1、胰蛋白酶原的提取与分离：称取 1－1.5 Kg 新鲜猪胰脏，在冰浴下剥除脂肪和结缔组织，在低温下用绞肉机绞碎胰脏 (或用 ...

脂肪组织特别是白色脂肪组织（WAT）已经被证实除了具有能量储存功能外，还与内分泌和器官炎症有关。从脂肪组织中提取和分析蛋白质对于了解许多生理/病理状态越来越重要。但是由于白色脂肪组织（WAT）和棕色脂肪组织（BAT）中高脂肪和低蛋白含量，所以在技术上极具挑战性。众所周知目前生物样品中水油乳化物最难分离，具有独特表面性质的带孔径的离心管柱和优化的无表面活性剂的缓冲液系统，可以快速有效的从脂肪组织匀浆中将水油乳化物 ...

大家目前最常用的方法是利用溶液法进行蛋白提取（如 RIPA 裂解液），但是往往会在蛋白质提取中产生两个不同的组分，即 RIPA 可溶性和 RIPA 不可溶性组分。通常 RIPA 不可溶性组分被我们直接丢弃忽略。但是已经有文章证实许多蛋白质存在于被丢弃的 RIPA 不可溶性组分中。也就是说利用溶液法提取的并非是完整的总蛋白，而仅仅是一些可溶性蛋白。溶液法进行提取蛋白时会人工激活 caspase-3 和 caspase-7；还会人工激活某些激酶活性；影响磷酸化研究； ...

Normal07.8 磅02falsefalsefalseEN-USZH-CNX-NONE脂肪组织特别是白色脂肪组织（WAT）已经被证实除了具有能量储存功能外，还与内分泌和器官炎症有关。从脂肪组织中提取和分析蛋白质对于了解许多生理/病理状态越来越重要。但是由于白色脂肪组织（WAT）和棕色脂肪组织（BAT）中高脂肪和低蛋白含量，所以在技术上极具挑战性。众所周知目前生物样品中水油乳化物最难分离，具有独特表面性质的带孔径的 ...

viola2010 您好，我是新手，请问核蛋白如何提取？试剂盒那个公司较好？kkndd 不用试剂盒，这篇1989年的文章的方法，我们实验室现在还在用，非常有效，非常简单，Nucleic. Acids. Res. (1989) 17: 6419. (PMID: 2771659)这是一篇比较新的文章，用的也是那篇89年的方法，Mol. Cell. Biol. (2000) 20: 8783-92. (PMID: 11073979)xhjggl 上海生工的 BSP009shylook 很多kit都可以用呀 ...

qingyu2010 打算挑战一下传说中的EMSA所以需要学习提取核蛋白了~不过因为还是菜鸟所以有个小问题。。。我想先做western检验一下核蛋白和胞质蛋白分离的好不好，该选择什么蛋白来检测呢？当然最好能是常用的或者以后也用的上抗体的蛋白啦~对于核蛋白，是不是用histone或者laminin或者大多数转录因子都可以？Thermo的网页上给的是OCT-1，某文献里是SP-1，我用c-Jun之类的OK么?_?对于胞质 ...

米宝 这俩天做实验，极其郁闷。我做的总AKt和pAkt,大鼠脑组织，第一次跑总AKT的时候，我觉得可能是因为蛋白是提取的浓度比较好吧，出来了一条浓浓的条带，三组总AKt都出了，接下来做pAkt,就出了一个带，效果挺明显的。后来再做pAkt的时候，跑了4张膜，显影的时候，太干净了，上面什么都没有，甚至连个杂带，斑点 都没！实验是在实验员的领导下完成的，技术上基本没什么纰漏，查阅本版面有关这问题方面的介绍，有的解释说pakt降解了 ...

winniw214 同样的菌液，用来提蛋白的。因为摇床问题，今天先摇了一半，离心后-80度冻存。另一半正在摇，准备明天离心冻存的。但是发现明天没有离心瓶了。由于是冻菌，不方便借别人的离心瓶。我是想可不可以将现在冻着菌的瓶子拿出来离，反正菌是一样的。但是我介意的是离心是4度，菌液冻存后从-80到4度，又累积了新的菌后又存-80，这样可以吗？紧急提问啊，在线等,谢谢！dnazyme 如果是哺乳动物肯定很多细胞死掉了.大肠也许坚强一些 ...

keep-smile 最近在做原代培养的神经细胞的凋亡研究。对于六孔板中蛋白提取有些疑问。药物处理后，总有一些细胞漂浮起来，估计就是凋亡或坏死细胞，直接吸弃培养基怕对凋亡相关蛋白检测有影响。如果细胞消化离心，又担心提取不够迅速使一些目的蛋白去磷酸化，比如MAPK信号通路蛋白。请问大家，应该怎么解决这个问题呢，有什么好的办法？ronaldo_zj 1. 我们也遇到过类似问题，但经过检测，我们发现培养基上清漂浮的细胞确实就是晚期 ...

owen79 各位大侠好，小弟愚问一下，我想测定NF-KB活化后细胞核内的量，这需要提取核蛋白，但是蛋白量太少，提取出来能否测出NF-KB啊！thank you !ronaldo_zj 1. 通过提取细胞核、细胞浆内的蛋白来行western blot检测NF-kappa B 的表达情况是可以的，因为很多时候是通过NF-kappa B转位来实现活化的，所以提取的时候我不知道楼主是自己配制试剂提取还是用试剂盒提取的，我建议可以将2-3皿细胞（当然是相同的 ...

wyj2002 低氧诱导因子-1 是一种核转录因子，看到有些文献直接抽胞浆蛋白进行实验，请问有经验的朋友，是抽取胞浆蛋白还是核蛋白？先谢过了！xhjggl 可以用胞浆蛋白和核蛋白提取试剂盒，确定其在胞浆和核中的的分布情况，也可能是在胞浆中合成再进入细胞核中的，上海生工就有这样的试剂盒卖。细胞核蛋白/浆蛋白抽提试剂盒Nuclear and Cytoplasmic Protein Extraction Kit产品说明：本试剂盒用于从哺乳动物组织 ...

月下独见 我最近打算提核蛋白做EMSA，我是自己配制的buffer，其中要加入100x Protease Inhibitor使buffer里含有1x Protease Inhibitor。这个100x Protease Inhibitor有没有买的？还是要自己配制。我查了一下资料Protease Inhibitor里含有Aprotinin Leupeptin Pepstatin PMSF，如果自己配Protease Inhibitor的话以上的试剂要 ...

daydayupmj 最近做了加入刺激因素后细胞AMPK的激活情况，我选择了0,30min ,60min,120min,240min提取蛋白，结果发现在60min 时总AMPK和P-AMPK表达都很弱，有几点不清楚，信号表达会在某个时间点突然降低，然后再回升吗,非磷酸化的蛋白也会随时间变化而变化吗，再有活化情况该如何比较daydayupmj 还有细胞在加入处理因素前需要同步化处理吗07yhguan daydayupmj wrote: ...

宝贝儿妮妮 请教各位大虾，我做的是AIF（凋亡诱导因子），激活后从胞浆释放到胞核，与DNA结合，引起DNA的片段化那我是不是必须得提取核蛋白，来证实发生了核转位？要怎么来提取效果好一点？时间紧急啊，非常感谢lily628 买抽提核蛋白的试剂盒，国内的或国外的都行．xhjggl 上海生工有 021-37772436细胞核蛋白质提取试剂盒Nucleoprotein Protein Extraction Kit产品说明：本试剂盒提供独特的组份， ...

ahuchxq 最近提NF-kB的核蛋白，是买的碧云天的试剂盒。一般提核蛋白都是有两个buffer，一个低渗的提胞浆蛋白，一个是高盐的提核蛋白的缓冲液，我想问的是，有没有可以不加核蛋白的buffer 直接把胞浆蛋白提取来后，直接加SDS 裂解液裂解上样做的?谢谢大家提供点信息。。。fangweibin119 ahuchxq wrote:最近提NF-kB的核蛋白，是买的碧云天的试剂盒。一般提核蛋白都是有两个buffer，一个低渗的提胞 ...

ahuchxq 最近要提取核蛋白，看NF-KB的近核情况，然后做western，师姐用了碧云天的试剂盒，但是提的不好，基本没有提出来，实验室其他人也用过，感觉也不是很好。请教高人指点，提供些经验！谢谢！fangweibin119 ahuchxq wrote:最近要提取核蛋白，看NF-KB的近核情况，然后做western，师姐用了碧云天的试剂盒，但是提的不好，基本没有提出来，实验室其他人也用过，感觉也不是很好。请教高人指点，提供些经验 ...

dldenglin 求细胞核蛋白提取的试剂配方，及步骤，最好是亲自做过的方法，万分感谢dldenglin 咋没有人理我呢johndxy117 来源不明，貌似是某文献作者传授给师兄的，自己试过几次，纯度很高，在此表示感谢~密度梯度离心法提核蛋白试剂Buffer A: 1.0mM MgCl225mM KCl10mM HEPES(pH 7.5)protease inhibitors 1:200Buffer B: 0.25mM sucrose in Buffer ABuffer N: 1.1mM su ...

Rachel1123 求助各位高手，RIPA裂解液提取的蛋白可以用于做STAT3的wb吗？还是需要专门提取核蛋白？多谢！顺便再问一句，stat3在胃癌细胞SGC7901中是否高表达？wangfanyun RIPA裂解液可以做stat3的WB。不需要专门提取核蛋白！zfyyzz00 一般来说，stat是转录因子，只有磷酸化的stat才有活性，它通过形成二聚体的形式进入细胞核内，和相关靶基因结合，启动靶基因转录，因此一般情况下 ...

tasthma 请问有没有那位战友用过activ motif 公司的核转录因子活性检测试剂盒TransAM p65啊？我想请教一下，是不是一定要做标准曲线啊？zhujoker 这种试剂盒一般都是需要做标准曲线的。tasthma 谢谢版主！那我还得买他们的标准蛋白才行啊zhuqueleee 没有必要的。我当时用的就是这个试剂盒，因为到最后数值都是以OD值表示的，而且试剂盒里面附带有核蛋白和竞争性Oligo作为系统的阳性阴性对照。而且提 ...

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