免疫荧光染色技术

关于荧光三标如何选择抗体？做免疫荧光实验中，经常要进行免疫荧光的双标记实验，也就是在同一个样本上同时进行两种蛋白的免疫荧光检测。具体的实验时，可以选择不同来源的一抗，然后再选择分别针对一抗的二抗，同时二抗上标记有不同的荧光团。一般的双标记实验里，都会选择一个绿色的（如FITC、Cy2、Dylight 488等）荧光标记，一个红色的（如Rhodamin、Cy3、TRITC、Texas Rad、Dylight 539等）的荧光标记。 ...

、非特异性染色的主要因素　　组织的非特异性染色的机理很复杂，其产生的原因主要可分为以下几点：　　（1）一部分荧光素未与蛋白质结合，形成了聚合物和衍化物，而不能被透析除去。　　（2）抗体以外的血清蛋白与荧光素结合形成荧光素脲蛋白，可与组织成分结合。　　（3）除去检查的抗原以外，组织中还可能存在类属抗原（如Forssman氏抗原），可与组织中特异性抗原以外之之相应抗体结合。　　（4）从组织中难于提纯抗原性物质，所以制备的免疫血清中往往混杂一些抗其 ...

【资料】荧光物质波长Fluorochrome Excitation Wavelength Emission WavelengthAcid Fuchsin 540 630Acridine Orange(Bound to DNA) 502 526Acridine Red 455-600 560-680Acridine Yellow 470 550Acriflavin 436 520AFA (AcriflavinFeulgen SITSA) 355-425 460Alizarin Complexon 530-560 ...

12月份ELISA讨论区http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=68&id=4999919&sty=1&tpg=7&age=0http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=68&id=5004878&sty=1&tpg=7&age=0http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=68&id=5016009&sty=1&tpg=6&age=0http://www.dxy.cn ...

为了保持细胞结构的自然状态和组织性形式，通常要经过化学固定来中止细胞中的酶及其他的代谢活动，使其尽可能的保持原有状态。而有些常用的固定剂用得不恰当，往往会造成假象或信号丧失，非特异性信号增高等。我总结了一下常见几种固定剂的特点与各位战友分享常见固定剂的特点比较---------------------------------------------------------------------------------------------------戊二醛 甲醛 冷甲醇/丙酮------------------------------- ...

Immunofluorescence MethodThe purpose of immunofluorescence is to detect the location and relative abundance of any protein for which you have an antibody. Once you have antibodies to your favorite protein, you can use them to indicate where the protein is located. In this example, we will use an ...

荧光素标记抗体技术撰稿　金伯泉、赵宁--------------------------------------------------------------------------------　　(一)　原理　　目前用于抗体标记的荧光素主要有异硫氰酸荧光素(Fluorescein isothiocynate,FITC)或罗达明(Lissamine rhodamine B200, RB200)。在硷性条件下FITC的碳酰胺键可与抗体赖氨酸的ε氨基共价结合，标记后的抗体仍保持与相应抗原结合的能力。在荧光灯源紫外线或兰紫光 ...

一、标本制作　　可制作涂片、印片、细胞单层培养物、组织切片，经适当固定或不固定，作免疫荧光染色用。　　二、荧光抗体染色方法　　（一）直接法　　1．染色 切片经固定后，滴加经稀释至染色效价如1：8或1：16的荧光抗体（如兔抗人γ-球蛋白荧光抗体或兔抗人IgG或IgA荧光抗体等），在室温或37℃染色30min，切片置入能保持潮湿的染色盒内，防止干燥。　　2．洗片 　倾去存留的荧光抗体，将切片浸入pH7.4或pH7.2PBS中洗两次，搅拌，每次5min，再用蒸馏水洗1m ...

最近在学习免疫荧光技术，总结方法如下。免疫荧光非特异性染色的消除方法一、非特异性染色的主要因素　　组织的非特异性染色的机理很复杂，其产生的原因主要可分为以下几点：　　（1）一部分荧光素未与蛋白质结合，形成了聚合物和衍化物，而不能被透析除去。　　（2）抗体以外的血清蛋白与荧光素结合形成荧光素脲蛋白，可与组织成分结合。　　（3）除去检查的抗原以外，组织中还可能存在类属抗原（如Forssman氏抗原），可与组织中特异性抗原以外之之相应抗体结合。　　（ ...

　一、标本制作　　可制作涂片、印片、细胞单层培养物、组织切片，经适当固定或不固定，作免疫荧光染色用。　　二、荧光抗体染色方法　　（一）直接法　　1．染色 切片经固定后，滴加经稀释至染色效价如1：8或1：16的荧光抗体（如兔抗人γ-球蛋白荧光抗体或兔抗人IgG或IgA荧光抗体等），在室温或37℃染色30min，切片置入能保持潮湿的染色盒内，防止干燥。　　2．洗片 　倾去存留的荧光抗体，将切片浸入pH7.4或pH7.2PBS中洗两次，搅拌，每次5min，再用蒸馏水洗1m ...

Immunofluorescence StainingFormaldehyde fixation for cultured/cytospun cellsAll steps are performed at room temperature unless otherwise indicated.Square and rectangular coverslips may be fixed and washed in small Coplin jars, 35 mm petri dishes, or 6 well TC trays.Small ro ...

今天偶尔在晶美网站看到量子点技术。感觉挺新鲜。拿来大家共享。《SCIENCE》评为2003年十大科学突破之一！！Quantum Dot Corporation是世界上专门提供量子点产品的公司！量子点（quantum dot， QD）又可称为半导体纳米微晶体（ semiconductor nanocrystal），是一种由II-VI族或III-V族元素组成的稳定的、溶于水的、尺寸在2~20nm之间的纳米晶粒。目前研究较多的是CdS、CdSe、C ...

免疫荧光常见问题1．问：免疫荧光：用免疫荧光方法做同样的内容，组织切片和培养细胞，两者操作过程中有哪些不同？参考见解：只是固定方法不同,细胞固定用甲醇,切片固定用多聚甲醛,而染色方法是一样的.2．问：近期要做免疫荧光双标，不知哪位有免疫荧光双标技术的详细步骤以及注意事项参考见解；我正在做冰冻组织切片的免疫荧光的双染。有些体会：1.选取primary antibodies时要来源于两种不同的动物，我用的是来源于rabbi ...

免疫荧光是标记免疫技术发展最早的一种，它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术，通过将抗体与一些示踪物质结合，利用抗原抗体反应进行组织或细胞内抗原物质的定位。免疫荧光步骤包括，细胞固定和通透，封闭，孵育一抗，二抗等。除了这些基本步骤，以下建议可以帮助您获得更好的实验结果。 1、细胞固定和通透 为达到最佳的检测效果，细胞需要经过固定和通透。这些步骤非常关键，细胞和抗原需要保证最佳的结构，并利于抗体与抗原 ...

序言随着人类基因组测序工作的基本完成，功能基因组学的研究逐渐成为研究的热点。而基因表达的调控又是功能基因组学的一个重要研究领域。研究某个蛋白因子的调控功能，可以通过对蛋白活性（激活或抑制其活性），蛋白数量（过表达Overexpression或基因缺陷型Knockout）, 以及蛋白功能（功能缺陷型蛋白Dominant-negative mutation）的控制，影响下游基因的表达，而下游基因的变化又可以通过基因芯片（cD ...

随着免疫荧光技术的不断发展，荧光染料及其标记的抗体偶联物也被广泛的应用于生物学实验中。目前，市场上抗体及蛋白标记的荧光染料主要有CFTM系列(BIOTIUM, USA); Alexa Fluor®系列(Life technology, USA); DyLight系列; Cy系列; IR Dye系列等等。使用最多的为Alexa Fluor®系列和CFTM系列。CFTM系列染料的核心对比Alexa Fluor®系列具有以下几点优势：1. 新型罗丹明核心罗丹明染料以优异 ...

认识脆折症脆性X染色体综合征（Fragile X Syndrome），简称脆折症，是与人类的性染色体，即X染色体相关的遗传病。那么是什么原因造成染色体的异常呢？这不得不提到人类基因组计划。人类基因组计划项目于1990年正式启动，该项目预算高达30亿美元，集合了多个国家顶尖科学家，共同揭开了组成人体4万个基因的30亿个碱基对的秘密。该项目发现的第一个引起疾病的基因突变就是FMR1 （即脆性X智力低下1号基因）。从而发现脆折症 ...

一、免疫荧光法 １．直接法 （1）冰冻切片、涂片、印片或单层 细胞培养 物按要求进行固定，石蜡切片常规脱蜡后用酶消化处理，然后水化，用0.01mol/L PH7.2---7.4PBS洗5分钟，冷风吹干，放入湿盒中。 （2）滴加经稀释的荧光抗体，37℃ 30-60分钟或4℃ 过夜（3）PBS 洗2次，蒸馏水洗1次

一、材料与试剂 1. 第一抗体 2. 第二抗体（Invitrogen） 3. 100%冰冷丙酮 4. 马血清（SantaCruz;sc-2483） 5. Hoechst 33342荧光染料（Invitrogen;H1399） 6. ProLong Gold抗褪色试剂（Invitrogen;P36934） 7. & ...

前言 免疫印迹法是一种对生物样本中的特异性蛋白进行检测分析的技术，是检测蛋白特异性、表达与分布的最常用方法。但是传统操作难以满足实验室高通量，规范化的检测要求。因此为适应临床诊断的需求，新的印迹法技术被不断的探索和发展。欧蒙作为全球血清学诊断领域的领导者，经过多年的探索和完善，提出了一套完整的免疫印迹法检测自动化解决方案，这大大提高了免疫印迹法检测的效率，实现了免疫印迹法检测结果的标准化判读和评 ...