基础知识

酶与抗体交联的方法有许多种,根据酶的结构不同可采用不同的方法。对于制备HRP结合物，可用戊二醛二步法和过碘酸钠法。尤以简易过碘酸钠法更为常用。　　戊二醛二步法　　1.　原理：戊二醛为一种双功能试剂，通过其醛基分别与酶和免疫球蛋白上的氨基共价结合，形成酶-戊二醛-免疫球蛋白结合物。　　2.　标记步骤：　　(1)　称取HRP25mg溶于1.25％戊二醛溶液中，于室温静置过夜。　　(2)　反应后的酶溶液经Sephadex G-25层析柱，用生理盐水洗脱。流速控制在1ml／1分 ...

虽然响应不是很积极，我还是再贴贴蛋白质的序列分析流程吧。罗嗦一句，提供的网址表示可以在该处进行免费分析。2.1 蛋白质序列的检索2.1.1 从NCBI检索蛋白质序列http://www.ncbi.nlm.nih.gov:80/entrez/query.fcgi?db=Protein2.1.2 利用SRS系统从EMBL检索蛋白质序列http://srs.ebi.ac.uk/2.2 蛋白质序列的基本性质分析(方案)2.2.1 蛋白质序列的信号肽分析htt ...

不知道大家是否清楚，我特地去查了一下原始文献，摘要中就有说明mascot中关于Iodoacetamide（碘乙酰胺） derivative的链接http://www.unimod.org/cgi/unimod.cgi?sort_field1=mono_mass&sort_field2=full_name&first_record_to_display=0&records_per_page=25&session_id=UT1DESR4 ...

重要说明：本贴公布以来得到站友积极响应，各位的切身体会和经历令大家受益匪浅。不过经过与出版社的协商，我们在后续征稿活动中对稿件的格式将有一定要求，因此我们重新公布了正式征稿帖。在本贴内跟贴的战友可以在新贴中将自己的帖子按照我们的格式要求重新编辑改写后重新投稿（请注明修改版）。或者我们也将对本贴内基本符合或者经改写后能够符合要求的稿件进行逐一审核，可能同投稿人沟通协商改写事宜，希望仍能得到您的支持和建议！本贴暂 ...

最近做实验在选择缓冲液，在咱们论坛上搜了搜，关于缓冲液的帖子很多，大多集中在缓冲液的配制方法上，关于开始时如何选择缓冲液却很少谈及，本人整理了论坛上关于如何选择各种缓冲液的加分贴，并配以合适的题名，希望对大家能有帮助！常用缓冲液的配制方法http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/5270608_1.html选择缓冲液的依据http://www.dxy.cn/bbs/actions/ ...

SELDI技术闲谈我总是在黑白之间徘徊，在那灰色的地带游走。一，Seldi的原理。Seldi技术，说来不复杂，ProteinChip和TOF-MS两个部分，有的专家说“蛋白质芯片”这个叫法不正确，当然了，我们以前讲的某某“芯片”是微点阵“Microarray”，不是“Chip”，翻译的问题而已。蛋白质芯片是将传统的生物色谱的表面集团固定到金属片基上，比如Q、NTA、C18这些，所以蛋白质芯片也分成了离子交换、金属螯合、正相 ...

目 录概述... 1手册的概述... 1双向(2-D)电泳概述... 1手册中使用的标记符号... 2第一向等电聚焦（IEF）的仪器选择... 3第二向SDS-PAGE电泳设备的选择... 4仪器的选择... 6等电聚焦系统的选择... 6第二向电泳的设备选择... 8MultiphorII平板型设备... 8垂直系统... 9实验室技术... 9第一章... 11样品制备... 111.0 样品制备——一般策略... 111.1 细胞破碎的方法... 131.1.1 温和的裂解方法... 131.1.2 剧烈的裂解方法... 151.2 防止蛋白质水解... 16 ...

七、八月是应助的淡季，整理蛋白版2006年07月无人应助帖如下（不包括重帖、极不规范帖和错发于版务区帖；其中无标题的不规范帖已用“...... ......."格式代为标出主要内容）， 请广大战友积极应助，加分从优！！！蛋白质组学讨论区：。【求助】各位，兄弟我要做分离纯化蛋白的研究课题，但国外有报道，但没有细节，我想做完研究生课题，这能行吗？http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=6707916&sty=1&t ...

Glycovirology Protocols (Methods in Molecular Biology, Vol 379)Publisher: Humana PressNumber Of Pages: 205Publication Date: 2007This volume reviews the increasing importance of glycosylation to the field of virology, as well as virus replication. The chapters provide an over ...

【求助】关于明胶酶实验http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=6725370&sty=1&tpg=26&age=0【求助】western problemhttp://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=6725679&sty=1&tpg=26&age=0【求助】包涵体洗涤及离子交换纯化问题http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=67 ...

狭义来讲，提取指制备物与细胞固体成分或其它结合成分的分离，由固相转入液相或从细胞内生理状态转入外界特定溶液环境的过程，即分离前期被提取物从破碎的细胞中释放出来的过程。如果被提取物程固相或与固体结合，提取时由固相转入液相，常称为固液萃取；如果被提取物已经呈液相存在，提取时由一液相转入转入另一互不相溶的液相，这种方法称为液液萃取。　　广义来讲，提取又可称为抽提或萃取，贯穿在整个分离纯化过程中，如核酸制备中用氯仿或苯酚反 ...

整理蛋白版2006年04月无人应助帖如下， 请广大战友积极应助，加分从优！！！蛋白质组学讨论区【求助】大哥哥姐姐，该网站的关于PMF\PST等介绍，放在哪啊？我在该网站看到这些技术的详细介绍，但当时忘保存，我找了精华贴总汇，没找到，能告诉我在哪放着http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5874150&sty=1&tpg=5&age=0【求助】请问如何解释鉴定出的蛋白质分子量/等电点大多数都有 ...

哺乳动物跨膜蛋白承担各种生物功能，在疾病的发生、发展过程中扮演重要角色。膜蛋白的蛋白质组学分析是被大家看好的辨识新的药物靶标和/或疾病的生物学标记的好方法，并已得到广泛应用。然而膜蛋白通过许多疏水氨基酸残基锚定在膜结构里面，很难溶解在水性缓冲液系统中。为了制备膜蛋白样品，传统的方法是采用“去污剂＋机械处理”的操作方法获取膜蛋白，用于增溶的去污剂有离子型（如SDS）和非离子型的（如Triton?-X）等，前者会使多数蛋 ...

我是第一次进行核蛋白提取，从文献上查到细胞裂解液和细胞核裂解液的配方如下细胞裂解液A液配方为：1 10mmol/L的Hepes（PH 7.9）2 10mmol/L KCl3 1.5mmol/L MgCl24 0.2%Igepal5 0.5mmo/L EDTA6 0.1mmol/L EGTA7 1mmol/L DTT8 0.25mmol/L PMSF配置细胞核裂解液B液方案：1 20mmol/L的Hepe（PH 7.9）2 420mmol/L NaCl3 1.5mmol/L MgCl24 2%Igepal5 0.5m ...

这本书学校图书馆可借的只有一本中文版，另外实验室还有一本。比较贵，中文版售价是198RMB英文版的价格就更贵了，希望需要的同学尽快下载。提供两种格式的英文版和一种格式的中文版。英文名称：GENES VIII中文版名称：基因八本书适用于分子生物学、分子遗传学及相关课程，是从事生物遗传学、生物化学、细胞生物学、基础医学等专业人员进行科学研究的重要参考书。20年前Benjamin Lewin 的Genes一书从根本上改变了当时分 ...

（一）第一向等电聚焦1. 从冰箱中取-20℃冷冻保存的水化上样缓冲液（I）（不含DTT，不含Bio-Lyte）一小管（1ml/管），置室温溶解。2. 在小管中加入0.01g DTT， Bio-Lyte 4-6、5-7各2.5ml，充分混匀。3. 从小管中取出400ml水化上样缓冲液，加入100ml样品，充分混匀。4. 从冰箱中取-20℃冷冻保存的IPG预制胶条（17cm pH 4-7），室温中放置10分钟。5. 沿着聚焦盘或水化盘中槽的边缘至左而右线性加入样品。在槽两端各1 ...

觉得是非常实用的的文章，不是泛泛而谈，详细到连如何带手套都包括在内。考马斯亮蓝染色双向电泳凝胶胶内酶切方法的改进廖翔1 应天翼1 王恒樑1 王杰2 魏开华2 黄留玉1 黄培堂1（1、军事医学科学院生物工程研究所，北京 100071；2国家生物医学分析中心，北京 100085）1.2 胶内酶解制备样品用剪刀将200μl Eppendorf 吸头尖端剪掉约1cm，孔的直径约为1mm，用修剪后的吸头从凝胶上戳取蛋白质点，再转入200μl离心管中。每管加入50μ ...

1 材料和方法1.1 材料1.1.1 组织和细胞的来源：1.1.2 仪器设备机械组织匀浆器低温高速离心机 (40,000 g)超速离心机超生细胞破碎仪超纯水装置1.1.3 试剂三氯醋酸 (TCA)丙酮二硫苏糖醇 (DTT)尿素CHAPSPMSFEDTA乙醇磷酸考马斯亮蓝R350抑肽素A亮肽素试剂纯度均应是分析纯或以上。1.1.4 溶液配制(1) PBS：NaCl 8 g, KCl 0.2 g, Na2HPO4 1.44 g, KH2PO4，溶于800 ml水中，用HCl调pH至7.4，用纯水定容至1 L；(2) ED ...

蛋白质复性史晋辉(天津大学化工学院生物化工系，天津 300072)关键词：蛋白质复性；环糊精；分子伴侣重组DNA技术为大规模生产目标蛋白质提供了崭新的途径。但人们在分离纯化基因工程表达产物时却遇到了意想不到的困难：很多利用大肠杆菌为宿主细胞的外源基因表达产物如尿激酶、人胰岛素、人生长激素、白介素-6、人γ-干扰素等，不仅不能分泌到细胞外，反而在细胞内聚集成没有生物活性的直径约0.1～3.0μm的固体颗粒棗包含体［1］。这些 ...

什么是转录因子？l 转录因子（Transcription factor，TF）是一类能与特异性DNA序列结合并调节基因转录的调控蛋白。l 转录因子通常是细胞内信号通路的核心蛋白，是将外界刺激转化为基因表达变化的关键调控者。为什么要研究转录因子？l 人体的35000多个基因在不同的组织、不同的时间具有表达差异性，转录因子的调控起到重要的作用。l 2012年的诺贝尔生理学或医学奖得主山中伸弥，在小鼠成纤维细胞中表达Oct3/4、Sox ...